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非洲马瘟病毒RT-PCR试剂盒

非洲马瘟病毒RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-21
  • 访  问  量:405
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0033
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

非洲马瘟病毒RT-PCR试剂盒

African Horse Sickness Virus(AHSV)

产品及特点

非洲马瘟病毒(African Horse Sickness Virus,AHSV)会引起非洲马瘟,是 一种马属动物的急性或亚急性传染病,该病以发热、皮下结缔组织与肺水肿以及 内脏出血为特征,只能通过昆虫传播。马对此病的易感性高,病死率高达 95%。 本病发生有明显的季节性和地域性,多见于温热潮湿季节,常呈地方流行或暴发 流行,传播迅速,因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。为此本公司开发了 本产品,可用于在科研领域快速定量检测非洲马瘟病毒。它具有下列特点:

1. 一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2. 根据非洲马瘟病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。

非洲马瘟病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橘黄盖)  

试剂二

 MMLV-Taq Mix

75 μL(红盖) 

试剂三

超纯水

1 mL(亮黄盖)

试剂四

非洲马瘟病毒 RT-PCR 引物混合液 

100 μL白盖) 

试剂五 非洲马瘟病毒 RT-PCR 阳性对  50 μL(黄盖)

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。 

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 非洲马瘟病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性 对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)

3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分: 

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

标准曲线 样品管(2-7 管)

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

非洲马瘟病毒 RT-PCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

 N+2 个制备的 RNA 样品12.5 μL   

超纯水

 

 12.5 μL

 

 非洲马瘟病毒 RT-PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液    12.5 μL
MMLV-Taq Mix  1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:

过程

温度

时间

逆转录

42℃

30 min

 预变性 95℃ 5 min

 

PCR 反应

35个循环

95℃ 

30 sec

 58℃30 sec

72℃ 

20 sec

 延伸 72℃ 7 min

 

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物, 则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照必须有预期条带出现,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期 片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。

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