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非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-21
  • 访  问  量:391
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0039
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

African Swine Fever Virus(ASFV)

产品及特点

非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)会引起非洲猪瘟等急性、出血性、烈性传染病,其特征是发病过程短,急性和急性感染死亡率高达100%,临床表现为发热(达40~42℃),心跳加快,呼吸困难,部分咳嗽,眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物,皮肤发绀,淋巴结、肾、胃肠粘膜明显出血,非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似,只能依靠实验室监测确诊,对养猪业造成严重损害,因此快速检测非洲猪瘟病毒具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测非洲猪瘟病毒的试剂盒,它具有下列特点:

1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化,灵敏性高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据非洲猪瘟病毒高度保守区设计,不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
6.本产品只能用于科研。

非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

2×Probe qPCR MagicMix

0.5 mL(本色盖) 

试剂二

荧光PCR模板稀释液

1 mL(黄盖) 

试剂三

非洲猪瘟病毒PCR引物

100 μL(白

试剂四

非洲猪瘟病毒qPCR探针

100 μL(棕色管)

试剂五 

非洲猪瘟病毒阳性对照2.0

(1×10E8拷贝/μL)

 

50 μL(红

试剂六 

天净沙核酸释释剂试用装

 

50次(2.5mL)

试剂七

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。 

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、稀释标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
3.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.如果有N个样品,设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
8.用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的天净沙核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板,省略了DNA提取步骤。
三、Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。
10.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后后加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各10 μL

非洲猪瘟病毒 qPCR探针

2 μL

2 μL

各2 μL

非洲猪瘟病毒 PCR引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

 待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7

不加

不加

6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

4.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:

 

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

PCR反应

40个循环)

94

0.5 min

55

0.5 min(采集FAM通道的荧光信号

72℃

0.5 min

后延伸

72

  • 10min

五、数据处理
12.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

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