小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒

小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒

本试剂盒用于培养上清中小鼠单克隆抗体Ig类、亚类的鉴定以及相关内容的研究。利用双抗体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克隆抗体或特异亲和纯化的单克隆抗体的类和亚类（可区分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA）。采用小鼠抗体共有位点的二抗包被微孔板，与加入的培养上清中的小鼠抗体结合，再加入HRP标记的抗小鼠各类、亚类的抗体来分别反应，后用TMB底物系统显色并用稀硫酸终止，再通过酶标仪检测吸光度来判断被测单克隆抗体的类或亚类。本试剂盒具有*的分辨率，是您鉴定小鼠单克隆抗体类、亚类的可靠工具。 试剂盒组成：

保存：2～8℃避光，有效期一年。 使用方法： 1．首先将试剂盒恢复室温（大约30分），然后用纯水把清洗液配成工作浓度（一份浓缩清洗液加19份纯水）。 2．取出酶标板。每个标本需要6孔，阳性对照6孔，阴性对照6孔。多余的用自封袋保存，记得放入干燥剂。 3．将标本检测孔每孔先加入标本稀释液各50μl。然后将50μl细胞培养上清（或特异亲和纯化的抗体）再加入酶标微孔板，每个标本加6孔；阳性对照和阴性对照孔不加标本稀释液也是各加6孔每孔100μl。贴上封板膜37℃温育30分钟。 4．弃去板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。再在每个标本的6孔中分别加入6种酶标二抗各100μl，通用阳性、阴性对照的各孔也一样。在加样图上或酶标板上做好标记。贴上封板膜37℃温育30分钟。 5．吸弃板内液体，洗板5遍后在不掉纤维的吸水材料上拍干或机洗5遍。每孔分别加入显色剂A和显色剂B各50μl，换一张新的封板膜贴板避光37℃显色20分钟。 6．本试剂盒特异性好一般肉眼即可观察出结果，看显色蓝的那个孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类。更可将反应终止液（每孔50μl）终止反应后用酶标仪450nm测定波长，630nm参考波长双波长测定结果，参看高值孔所对应的酶标二抗就知道此标本的Ig类或亚类(阳性对照OD一般不小于0.8，阴性对照一般不高于0.15，阳性判定标准：样品OD大于阴性OD+0.15，阴性OD低于0.05按0.05算)。 注意事项： 1．虽然本试剂盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。 2．在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的F030215抗体鉴定试剂。它会给您带来满意的结果,同时您也可以使用抗原包被板来解决此类问题。 3．手洗板子时一定要把孔加满，停留10秒然后弃尽，后要拍干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。 4．一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好，随盒存放。 5．拿放板子时不要剧烈抖动，以免孔间交叉污染出现错误结果。 6．通用阳性对照数据并不一定*一样，仅作为试剂有效指示。 本试剂盒一般不会出现两个阳性，但出现两个阳性的现象不论在进口或国产试剂中都是真实存在的，一般会一个OD很高,另一个很低但却还能判为阳性，实验分析表明这种情况下以OD高值孔为准，出现这种情况有多重原因： 1．培养的细胞中有“饲养细胞”残留； 2．抗体本身存在变异； 3．样品为非特异亲和纯化的抗体或样品是腹水； 4．上清出现少量污染； 5．实验操作粗放； 6．加错试剂。

小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒原理:

问：请问标曲是每次都要做吗？

答：是的，每次实验，孵育时间，洗板次数等等条件均不一样，不同实验的标曲不能混用，做一次实验需要做一次标准曲线，并且用当次，同一块板上的标准曲线结果去计算板内样品的浓度，才能得到准确的结果。

问：做预实验时每种要做几个复孔呀？

答：预实验视情况而定，如果整个板子孔数较为充足，建议两个复孔，如不充足，单孔也可以。要尽量保证实验过程中加样准确。

问：血清样本少量溶血，颜色稍深，对结有影响吗？

答：会有影响，建议取样时需注意，避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限，建议用样本稀释液适当稀释，减少基质效应影响。

问：试剂盒有推荐稀释浓度还需要自己测吗？

答：试剂盒一般会给出不同样品的推荐稀释比例，但是为大致范围，还是根据自己的样本情况，设计预实验测量计算。

问：加完终止液之后测的几次数据差别也蛮大？

答：加完终止液后，显色反应也不是永远停止，形成的黄色颜色会随着时间延长继续加深，建议在15 min内读数。

问：副孔差别比较大，是没洗干净吗？

答：复孔值差异较大，主要原因应考虑加样是否准确，洗板过程中是否有残留以及是否有交叉污染。

问：配好的抗体没用完如何保存，可保存多久？预实验用了一个试剂盒里面的部分板子和试剂，剩下的板子和试剂还能继续用于正式实验吗？

答：一般来讲，配好的母液，可以在四度保存，多一个月左右。剩下的板子和试剂是可以继续用于正式实验的，间隔时间不要太长，一个月之内均可，需注意试剂避免污染，板子保持干燥。

问：后显示的OD值在多少之间属于可用值，有要求吗？

答：有的，建议标准曲线高浓度点的OD值在2.0左右较好，也可参考说明书标曲的数据。

问：样本总是在标准曲线之外，稀释100倍也是，怎么办？

答：在设置稀释倍数之前，需要参考相关文献，对于一些表达*的蛋白，确实会出现这种情况，建议继续提高稀释比例。

问：试剂盒推荐用450和540nm双波长检测，但条件有限可否换成450和620的双波长？如何使用校准波长？还有，用空白孔校准可以么？

答：可以的，TMB底物显色后，吸光峰值在450nm，另外的校准波长是防止气泡等杂质造成的干扰设置，避开450左右50nm以上即可。两次读取的OD值，用OD450 - OD校准波长即可。尽量还是建议有条件的选用双波长校准的方法，因为避免了不同孔的读数影响，防止出现空白孔污染，导致读数较高，无法校准的情况。

问：ELISA可以检测胞内蛋白么？

答：可以的，选用支持组织匀浆的ELISA试剂盒即可，将组织样品或细胞样品进行裂解，提取胞内蛋白后进行蛋白定量，保证每孔上样总蛋白量一致即可。

问：ELISA试剂盒显色液是双组份的，有些其他品牌的是单组分的，使用单组分的有影响么？

答：HRP酶标二抗的ELISA试剂盒，显色底物一般为TMB，TMB不稳定，曝光或污染氧化后会出现显色反应，导致实验背景升高，或无法使用，所以爱必信的ELISA试剂盒将显色液调整为双组份，方便稳定保存，仅在使用前混合，避免了TMB的不稳定影响实验结果。如您选用的试剂盒为单组分显色液，在使用前检测是否为无色透明，如果是正常的，对结果也没有影响，可以放心使用。

问：整个过程需要避光吗？避光需要避到什么程度呢？

答：ELISA实验中，在酶标抗体孵育，以及显色底物孵育这两步建议避光，其他步骤无需避光。避光可采用锡纸包裹，或将整个ELISA板子放入暗盒或抽屉等无光处即可。