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小鼠TWEAK检测试剂盒

型    号:
所属分类:小鼠ELISA试剂盒
报    价: 市场价:1280
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小鼠TWEAK检测试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法,用于体外定量分析小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清中TWEAK的含量。预先包被的抗体为TWEAK单克隆抗体。检测相抗体为TWEAK多克隆抗体,经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;

小鼠TWEAK检测试剂盒产品概述:

小鼠TWEAK检测试剂盒

本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法,用于体外定量分析小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清中TWEAK的含量。预先包被的抗体为TWEAK单克隆抗体。检测相抗体为TWEAK多克隆抗体,经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的TWEAK呈正相关。

检测指标:TNFSF12;TWEAK;TNF相关弱凋亡诱导因子
检测范围:15.6pg/ml~1000pg/ml
特异性:系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性:<1pg/ml

产品组成:

组分规格数量
预包被抗小鼠TWEAK抗体的96孔板96T1板
重组小鼠TWEAK标准品(冻干)10ng/管2管
生物素标记抗小鼠TWEAK(100X)130μl1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)130μl1管
样品稀释液30ml1瓶
抗体稀释液12ml1瓶
ABC稀释液12ml1瓶
TMB显色液10ml1瓶
TMB终止液10ml1瓶
洗涤缓冲液(25X)20ml1瓶
封板膜 4张



储存条件:2-8℃(频繁使用时),-20℃(长时间不用时)
有效期: 6个月(4℃);12个月(-20℃)

参考标准曲线数据:(取自某一批次质检数据,仅供参考,用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)015.631.262.51252505001000
OD值0.0100.0870.1650.3240.6171.1441.9382.563
 

小鼠TWEAK检测试剂盒原理:

问:同一样品多次活性测试结果差异大怎么解决?

 

答:样本保存不当,会导致多次实验结果偏差较大,样本应尽量减少反复冻融,如需多次检测,需在取样后分装保存。

问:请问标曲是每次都要做吗?

 

答:是的,每次实验,孵育时间,洗板次数等等条件均不一样,不同实验的标曲不能混用,做一次实验需要做一次标准曲线,并且用当次,同一块板上的标准曲线结果去计算板内样品的浓度,才能得到准确的结果。

问:做预实验时每种要做几个复孔呀?

 

答:预实验视情况而定,如果整个板子孔数较为充足,建议两个复孔,如不充足,单孔也可以。要尽量保证实验过程中加样准确。

问:血清样本少量溶血,颜色稍深,对结有影响吗?

 

答:会有影响,建议取样时需注意,避免溶血、脂血等样本。如样本条件受限,建议用样本稀释液适当稀释,减少基质效应影响。

问:加完终止液之后测的几次数据差别也蛮大?

 

答:加完终止液后,显色反应也不是永远停止,形成的黄色颜色会随着时间延长继续加深,建议在15 min内读数。

问:副孔差别比较大,是没洗干净吗?

 

答:复孔值差异较大,主要原因应考虑加样是否准确,洗板过程中是否有残留以及是否有交叉污染。

问:后显示的OD值在多少之间属于可用值,有要求吗?

 

答:有的,建议标准曲线高浓度点的OD值在2.0左右较好,也可参考说明书标曲的数据。

问:样本总是在标准曲线之外,稀释100倍也是,怎么办?

 

答:在设置稀释倍数之前,需要参考相关文献,对于一些表达极高的蛋白,确实会出现这种情况,建议继续提高稀释比例。

问:试剂盒推荐用450和540nm双波长检测,但条件有限可否换成450和620的双波长?如何使用校准波长?还有,用空白孔校准可以么?

 

答:可以的,TMB底物显色后,吸光峰值在450nm,另外的校准波长是防止气泡等杂质造成的干扰设置,避开450左右50nm以上即可。两次读取的OD值,用OD450 - OD校准波长即可。尽量还是建议有条件的选用双波长校准的方法,因为避免了不同孔的读数影响,防止出现空白孔污染,导致读数较高,无法校准的情况。

问:ELISA可以检测胞内蛋白么?

 

答:可以的,选用支持组织匀浆的ELISA试剂盒即可,将组织样品或细胞样品进行裂解,提取胞内蛋白后进行蛋白定量,保证每孔上样总蛋白量一致即可。

问:ELISA试剂盒显色液是双组份的,有些其他品牌的是单组分的,使用单组分的有影响么?

 

答:HRP酶标二抗的ELISA试剂盒,显色底物一般为TMB,TMB不稳定,曝光或污染氧化后会出现显色反应,导致实验背景升高,或无法使用,所以爱必信的ELISA试剂盒将显色液调整为双组份,方便稳定保存,仅在使用前混合,避免了TMB的不稳定影响实验结果。如您选用的试剂盒为单组分显色液,在使用前检测是否为无色透明,如果是正常的,对结果也没有影响,可以放心使用。

问:整个过程需要避光吗?避光需要避到什么程度呢?

 

答:ELISA实验中,在酶标抗体孵育,以及显色底物孵育这两步建议避光,其他步骤无需避光。避光可采用锡纸包裹,或将整个ELISA板子放入暗盒或抽屉等无光处即可。

问:标准曲线在推荐的浓度下,r值为0.9,做了多次都是这样,怎么办?

 

答:要仔细核对产品说明书,看是否用了推荐的拟合方法,如爱必信的ELISA试剂盒,需要使用四参数拟合方式进行拟合,用错拟合方式,会导致r方值较低;如拟合方式无误,需检查是否有个别标曲孔数值异常,排查实验中是否出现污染或倍比稀释时出现失误。

问:封板膜什么时候用?每次加液后都要换吗?

 

答:封板膜在孵育样品、检测抗体以及HRP酶标抗体是,都要盖好封板膜,减少挥发及污染几率。每次使用后要更换新的封板膜。

问:手动洗板过程中,拍过抗体或抗原的滤纸需要扔吗?

 

答:是需要更换的,防止造成交叉污染,影响实验结果的准确性。

问:有的wash buffer析出结晶后在37℃也不溶解,怎么办?

 

答:可提高至55度,并多次摇晃。溶解后按比例稀释即可使用。

问:测得的值都低于标准曲线的低值,是什么原因,应该怎么解决?

 

答:原因较多,首先是检查样品是否稀释倍数过高,降低稀释比,直至直接加样本原液,如还检测不出,需排查原因,建议在实验组别设置中添加阳性对照孔,用明确表达的样品作为阳性对照,如果标准曲线及阳性样品均可测得正常的表达浓度,则表明实验成功,其余待测样品表达含量低于检测下限,按照0计算即可。这种情况尤其对于炎症因子较为常见,在健康样本中,表达含量极低。

问:因为检测限的原因,同一块ELISA板子,部分样本稀释,部分样本1:10稀释,部分1:20稀释,这样设置可行吗?结果可以比较吗?

 

答:可以比较,不同稀释比例,是因为不同样本间的表达差异较大,只要保证稀释后的检测样品测量值准确,还原回稀释倍数后的浓度是可信的。可以用来比较不同样本的原始浓度差。

问:试剂盒里面有捕获抗体么?

答:即用型ELISA试剂盒中,捕获抗体已经预包被至试剂盒中的ELISA板上,没有单独的捕获抗体提供,直接使用ELISA板孵育稀释后的样本及标准品即可。

问:ELISA实验中,检测计算抗原的浓度,临界值怎么确定?

 

答:根据曲线测定的浓度,建议落在标准曲线的中间位置较好,极限不要超过标准曲线的上下限,如果超出较多,会影响计算结果准确性,建议调整稀释比例。

问:In vivo周期长的话,不太好做预实验,怎么办?

 

答:In vivo造模取样后,可将样品分装,取一部分样品做ELISA预实验,剩余样品再进行正式实验;如多批次实验,操作较为一致,后续可取消预实验,根据前期结果进行ELISA实验浓度设置。

问:做实验前怎么知道待测血清中炎症因子的范围呢?多大是高多小是低?

 

答:需要根据文献推测,一般在健康人样本中,炎症因子表达很低,接近ELISA检测下限,样品无需稀释或1:1稀释即可,如已知为炎症疾病或造模样本,可参考文献,在预实验中设置1:10-100(或更高)的稀释比例,预实验检测后确定佳浓度进行正式实验。

问:ELISA实验中的洗板步骤如果没有洗板机,需要如何操作?

 

答:实验室ELISA实验做的较多,还是建议使用洗板机洗板,效果更好,也更方便控制。如果没有洗板机,在洗板过程中,需要注意洗板液添加后不要从孔中溢出,在加洗板液后,静置1-2min,甩干液体后,在吸水纸上大力拍干;重复三次。

问:ELISA实验中,酶标抗体识别的是哪个抗体?

 

答:在双抗夹心法ELISA中,酶标抗体识别的是检测抗体,对检测抗体进行识别和酶标记。

问:捕获抗体如何包被在96孔板上?

 

答:如果选用的是即用型ELISA试剂盒,无需进行抗体包被;如果是非即用型的ELISA试剂盒,首先,要选择ELISA级别的板子,材质应为聚苯乙烯;然后用抗体包被液稀释(pH9.6的碳酸盐缓冲液或pH7.2的PBS或pH7-8的Tris-HCl)成工作浓度,然后每孔加100 μl稀释后的捕获抗体,室温或4℃过夜包被,然后进行洗板和封闭之后即可使用,如需长期保存,需要真空冻干后保存

问:ELISA实验中的捕获抗体和检测抗体是同一个抗体么?

 

答:不是的,在双抗夹心法ELISA实验中,会同时用到捕获抗体和检测抗体,这两个抗体是针对同一抗原蛋白的不同抗原位点的两种抗体,这样才可以同时结合抗原分子。

问: ELISA可以测DNA的表观么?

 

答:不可以,ELISA是利用免疫学原理,定量检测蛋白质表达的技术。测DNA表观遗传学,主要是检测DNA甲基化,可以选用ChIP技术。

 

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