XL1-Blue Electroporation-Competent Cell

XL1-Blue Electroporation-Competent Cell

产品规格

XL1-Blue       50μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                                10μl

保存条件(保质期)：                                         -80℃（6个月）

基因型

recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 supE44 (r_k^-,m_k⁺), relA1 lac [F' proAB lacI^qZ∆M15: Tn10 (Tet^R)]

XL1-Blue Electroporation-Competent Cell产品说明

XL1-Blue电击感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。XL1-Blue菌株能保证高拷贝质粒稳定复制，recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdR17突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。 lacI^qZΔM15 的存在使XL1-Blue菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素抗性。XL1-Blue电击感受态细胞适用于各种文库构建，经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率可达1×10¹⁰ cfu/μg DNA。

操作方法

1. 0.1cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的XL1-Blue电击感受态细胞插入冰中5 分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

A. 测定转化效率使用1 μl 10 pg/μl的对照质粒 pUC19；

B. 对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重悬，DNA浓度不超过100ng/μl，体积不超过5μl/50μl 感受态。

3. 用200 μl枪头将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。

4. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数，也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。

5. 2分钟后从冰中取出电击杯，放室温，加入700 μl不含抗生素的无菌S.O.C. 培养基（室温），用1ml枪吹吸电击杯底部数次混匀后，转移到50ml离心管（BD Falcon50ml锥形离心管等），向离心管中补加S.O.C. 培养基至5ml。37℃，225 rpm复苏60分钟。

6. 5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200 μl涂布到含相应抗生素的S.O.C平板上（因菌量较大，若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个）。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养13-17小时。