CHO-K1 中国仓鼠卵巢细胞（悬浮细胞）

CHO-K1 中国仓鼠卵巢细胞（悬浮细胞）

细胞名称

CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株

细胞描述

该细胞株是源自成年中国仓鼠卵巢深入活体组织切片的CHO细胞的亚克隆。在本库通过支原体检测。

动物种别：中国仓鼠

性别：雌

组织来源：卵巢

形态：上皮细胞

细胞驯化前的培养基的培养条件

F12K培养基，90%；优质胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度。

供应限制：仅供研究之用。

细胞株驯化： 

复苏CHO-K1细胞转入T25 cm2细胞培养瓶，以F12K基础培养基添加10%血清培养，待细胞长满单层后，加入 0.25 % 胰蛋白酶消化，传代至装有*培养基的T25 cm2细胞培养瓶（Corning）中继续培养，当细胞铺满瓶底时，即得贴壁 CHO-K1 细胞。取贴壁CHO-K1 细胞，换液，加入15 mL含血清的*基和 15 mL无血清CHO-K1培养基，2天后吸出一半培养液，加入等量的无血清CHO-K1，每2天重复一次此操作，直到胎牛血清浓度低于 1 %后，以基础培养基B001 继续培养，即培养基中血清浓度依次以 5 %，2 .5 %，1.25%，0.625 %，0 %降低。细胞在无血清CHO-K1培养基中密度达到5 ×106cells/ mL时，即得悬浮 CHO-K1 细胞。培养条件：37℃，5 % CO2培养箱中静置培养。

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

CHO-K1 中国仓鼠卵巢细胞（悬浮细胞）细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基）。

6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议1：2传代 。

细胞培养步骤：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备：CHO GROW CD2 培养基    98 %

GlutaMAX-1谷氨酰胺              1%

P/S青霉素-链霉素   1%

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90% CHO-K1培养基，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3） 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。   

下面T25瓶为类；

1，细胞冻存时，取上清，可使用血球计数板计数。

2，4min ，1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度1-2xE6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

声明：细胞产品仅供科学研究之用，严禁转售、共享、分发、出借、赠送给任何第三方

关于细胞售后服务

1、收到细胞24小时内出现细菌、真菌、霉菌污染，72小时检测支原体阳性属于产品质量问题，无条件重发；需拍照我司确认，且非客户人为因素引起。

2、细胞运输途中受很多不可控因素（强烈震荡，温度变化，时间长等）影响，达不到理想生长状态，收到后麻烦检测细胞是否漏液，漂浮并且不能恢复贴壁能力，死亡等状况，48小时内提出并反馈如上情况，本公司为维护客户利益，承诺给客户免费补寄一次，但不建议和不提供免费补寄第二次及以上；

3、享有1个月的超长售后期；