过表达OVA的小鼠肺癌细胞 荧光素酶标记

LLC-OVA-LUC (过表达OVA的小鼠肺癌细胞 荧光素酶标记)

二、细胞接收后的处理

1) 收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于室温放置约1h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2) 请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3) 半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于室温放置约1h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长80%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

4) 备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。  收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

三、细胞培养操作

1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含8mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

【该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：】

a) 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

b) 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入5-6ml含10%FBS的培养基来终止消化。

c) 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；

a) 收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b) 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度1×10^6~1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c) 将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

四、培养注意事项

1) 细胞出现问题，予以重发情况

a) 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

b) 细胞污染问题，请在收到产品3 天内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

c) 常温发货的细胞静置2小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后2 天后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

d) 干冰冻存发货的细胞复苏后2天后或常温发货的细胞静置2 小时候并且未开封，出现污染，重发；

e) 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，和每天的细胞照片，核实后予重发；

f) 细胞收到当天以及第2,3 天请拍照，3 天未告知的，视为产品合格。4-7 天内出现问题需提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题的照片以及细胞相关操作的详细步骤，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。

2) 细胞出现问题，不予以重发的情况

a) 客户操作造成细胞污染，不重发；

b) 客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发；

c) 非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

d) 细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前3 天的细胞状态照片，不重发；

e) 细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发；

f) 收到细胞并发现问题与客服人员沟通的时间证明大于7 天的，不重发；

g) 视具体情况而定

五、注意事项

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

3. 该细胞仅供科研使用！说明书仅供参考以实际到货说明书为准！

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。