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胸膜肺炎放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

胸膜肺炎放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒是一种呼吸道寄生菌,主要存在于患病动物的肺部和扁桃体,病猪和带菌猪是本病的主要传染源。本病的感染途径是呼吸道,即通过咳嗽、喷嚏喷出的分泌物和渗出物而传播,而接触传播可能是其主要的传播途径。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-20
  • 访  问  量:396
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0022
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

胸膜肺炎放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

Abalone Herpes-like Virus(AbHV) SYBR qPCR Kit

产品及特点

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)是一种呼吸道寄生菌,主要存在于患病动物的肺部和扁桃体,病猪和带菌猪是本病的主要传染源。本病的感染途径是呼吸道,即通过咳嗽、喷嚏喷出的分泌物和渗出物而传播,而接触传播可能是其主要的传播途径。国内外的研究及临床实践表明,猪患呼吸系统疾病时,容易发生继发感染或混合感染。如本病与猪伪狂犬、兰耳病、多杀性巴氏杆菌、肺炎霉形体、嗜血杆菌等病原的混合感染,应引起高度重视,因此快速检测胸膜肺炎放线杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测胸膜肺炎放线杆菌的试剂盒,它具有下列特点:

1.即开即用,用户只需要提供DNA模板。

2.特异性高,引物是根据人胸膜肺炎放线杆菌高度保守区设计,不会扩增其他细菌。

3.引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规PCR高100倍。

4.提供无传染性的PCR阳性对照,便于区分假阴性样品。

5.一管式操作,荧光PCR检测,不容易产生环境污染。

6.本产品只能用于科研,本试剂盒足够50次20μL体系的PCR。

胸膜肺炎放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(亮黄盖

试剂三

胸膜肺炎放线杆菌PCR引物混合液

100 μL(白盖)

试剂四

胸膜肺炎放线杆菌PCR阳性对照

(1×10E8拷贝/μL)

50 μL(红盖)

试剂五

天净沙核酸释放剂试用装

20次(1mL,绿盖)

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输、-20℃保存,有效期一年。

自备试剂 样品DNA。

使用方法 一、制备标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。

2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)。

3.在7号管中加入5 μL 阳性对照(其浓度为1×10E8拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡1分钟,1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品DNA的制备

7.用自选方法纯化样品的DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8.如果有N个样品,则需要进行N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的天净沙核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板,省略了DNA提取步骤。

三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)

9.如果进行定量分析,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。

10.在标记管中按下表加入各成分:

成分

N+2

样品管

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各10 μL

胸膜肺炎放线杆菌 PCR引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

自备10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各2 μL

 N+2个待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

自备超纯水

不加

6 μL

不加

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7

不加

不加

6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

 11.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

PCR反应

(40个循环)

94

0.5 min

 

50℃

0.5 min(采集SYBR通道的荧光信号

 

72℃

0.5 min

后延伸

72

  • min

 

五、数据处理
12.设定60℃-96℃范围的融解曲线分析,排除假阳性。

13.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。

14.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

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