腺伴随病毒PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。
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品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0025 |
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规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
腺伴随病毒PCR试剂盒
Adeno-associated Virus(AAV)
产品及特点
腺伴随病毒(adeno associated virus,AAV)属细小病毒科,病毒颗粒 直径为 20nm,无包膜,20 面体,为目前动物病毒中简单的一类单链线状 DNA 病毒。人群中,AAV 感染率很高,85%的人呈血清抗体阳性,但是未发 现 AAV 引起人体疾病,甚至早年的流行病学研究报告认为,AAV 感染者减少 了患癌的危险性。因此快速灵敏检测腺伴随病毒具有重要意义。本产品就是为 此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增腺伴随病毒,与其他病毒没有交叉 反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
腺伴随病毒PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1mL(红盖) |
试剂二 | 超纯水 | 1 mL(亮黄色) |
试剂三 | 腺伴随病毒 PCR 引物混合物 | 100 μL(白盖) |
试剂四 | 腺伴随病毒 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL(红盖) |
试剂五 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20 次(1mL,绿盖) |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要 求的样品起始量)中加 10μL 腺伴随病毒 PCR 阳性对照的 1 万倍稀释液 而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。 二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | 标准曲线 样品管(2-7 管) |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20μL | 20μL | 20 μL |
腺伴随病毒 PCR 引物混 合液 | 各 20μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 个待测样品 DNA 模板 | 各 |
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PCR 阴性对照(水) | 18 μL | ||
PCR 阳性对照(腺伴随病 毒 PCR 阳性对照的 1 万 倍稀释液) |
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| 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5min |
PCR 反应 (35个循环) | 95℃ | 15 sec |
72℃ | 60 sec | |
55℃ | 15 sec | |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 136bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩 增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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