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非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒

非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-21
  • 访  问  量:432
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0036
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒 

African Swine Fever Virus(ASFV)

产品及特点

非洲猪瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病,病死 率几乎高达 100%,ASF 近在我国爆发,给我国养猪业造成重大损失,因此 ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用,为此本公司开发了 简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒,它具有下列特点: 

1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA。

2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段,不需要荧光 PCR 等贵重仪器。 同时扩增时间只需要 1 小时,尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。

3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特异性高,由于使用四条针对 ASFV 保守基因的特异引物,比使用 2 条引 物的 PCR 专一性更高。

5. 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验结果。

6. 每个反应的线性范围:10E2-10E7 拷贝/μL,低灵敏度:10 拷贝/μL。

7. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。 

非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×可视化 UNG-LAMP MagicMix

500μL(绿盖) 

试剂二

非洲猪瘟病毒 LAMP 引物混合液 

200μL(白盖)

试剂三

非洲猪瘟病毒 LAMP 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL)

50μL(黄盖)

试剂四

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。MRSALAMP 阳性对照单独放 置,不要污染其他试剂

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化细菌样品 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提 取试剂盒兼容,包括本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout,可去公司搜索。

2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个样品制备,包括一个样品制备阳性对 照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。样品使用量根据所选择的试剂 盒决定。如果样品使用量为 XmL,则在 XmL 水中加 10μLMRSA LAMP 阳性对照的 10000 倍稀释液作为样品制备阳性对照,样品制备阴性对照是 直接用 X mL 水作为阴性对照,然后和 N 个样品一起进行细菌 DNA 提取 操作,得到 N+2 个 DNA 样品。

二、LAMP(20μL 体系)

3. 反应设置:如果有 N+2 个 DNA 纯化样品,则设置 N+4 个 LAMP 扩 增,增加 LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中加入下 列成分:

成分

N+2 个 样品管 

LAMP 阴性对照管

LAMP 阳性对照管

2 ×可视化 UNG-LAMP MagicMix

各 10 μL 

10 μL

 10 μL

非洲猪瘟病毒 LAMP 引物混 合液

各4 μL

4 μL

4 μL

N+2 个样品 DNA 

各 6 μL

 

 

LAMP 阴性对照(水) 

 

6 μL

 

LAMP 阳性对照(非洲猪瘟 病毒 LAMP 阳性对照的 100 倍稀释液) 

 

 

6 μL


4. 混匀,此时反应液呈现非常浅的蓝色,由于是否有反应是跟阴性对照和反 应前对比,所以一定要设置阴性对照,并且反应前要手机照相留存以供反 应后比对。

5. 置于 25℃5 分钟(让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染),然后放 63℃扩增 60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温,必须加热盖。如果用金属浴保温,没 有热盖,必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙,并且在管中加 50uL 石蜡油,否则保温期间反应体系的水分会蒸发,影响反应效率)。

6. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。

7. 将反应管放置在白色背景(如白纸)前观察,观察反应液颜色并用手机照 相留底。

8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色,无模板的阴性对照将呈现无色或非 常浅的蓝色,样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增,如果接近阴 性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图(9 号为阴性,10 号为阳 性,此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同 的两个样品):

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