非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒

非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒 

African Swine Fever Virus(ASFV)

产品及特点

非洲猪瘟(African Swine Fever、ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病，病死 率几乎高达 100%，ASF 近在我国爆发，给我国养猪业造成重大损失，因此 ASFV 的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了 简单快捷的 ASFV 可视化 LAMP 检测试剂盒，它具有下列特点： 

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。

2. 用 LAMP 恒温扩增法扩增 ASFV 特异片段，不需要荧光 PCR 等贵重仪器。 同时扩增时间只需要 1 小时，尤其适合现场或实验条件简陋的单位使用。

3. 检测灵敏性比 PCR 高 10 倍以上。

4. 特异性高，由于使用四条针对 ASFV 保守基因的特异引物，比使用 2 条引 物的 PCR 专一性更高。

5. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

6. 每个反应的线性范围：10E2-10E7 拷贝/μL，低灵敏度：10 拷贝/μL。

7. 本试剂盒足够做 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。本产品只能用于科研。 

非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。MRSALAMP 阳性对照单独放 置，不要污染其他试剂

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化细菌样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提 取试剂盒兼容，包括本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout，可去公司搜索。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对 照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂 盒决定。如果样品使用量为 XmL，则在 XmL 水中加 10μLMRSA LAMP 阳性对照的 10000 倍稀释液作为样品制备阳性对照，样品制备阴性对照是 直接用 X mL 水作为阴性对照，然后和 N 个样品一起进行细菌 DNA 提取 操作，得到 N+2 个 DNA 样品。

二、LAMP（20μL 体系）

3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则设置 N+4 个 LAMP 扩 增，增加 LAMP 阴性对照和阴性对照各 1 个。在 N+4 个 PCR 管中加入下 列成分：

4. 混匀，此时反应液呈现非常浅的蓝色，由于是否有反应是跟阴性对照和反 应前对比，所以一定要设置阴性对照，并且反应前要手机照相留存以供反 应后比对。

5. 置于 25℃5 分钟（让 UNG 灭活可能的 LAMP 的污染），然后放 63℃扩增 60 分钟。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没 有热盖，必须在孔中加水以填充孔和管子间的空隙，并且在管中加 50uL 石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率）。

6. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶和 UNG 酶。

7. 将反应管放置在白色背景（如白纸）前观察，观察反应液颜色并用手机照 相留底。

8. 实验结果分析。阳性对照将呈现蓝色，无模板的阴性对照将呈现无色或非 常浅的蓝色，样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增，如果接近阴 性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图（9 号为阴性，10 号为阳 性，此处的 9 号和 10 号跟下步的电泳照片中的 9 号和 10 号是相同 的两个样品）：