疱疹病毒LAMP试剂盒

疱疹病毒LAMP试剂盒

B Virus(BV)B

产品及特点

B 疱疹病毒（B Virus，BV）又称猴疱疹病毒 I 型，其因感染猴类而得名， 但是当人被感染 BV 的猴咬或抓伤后也可发生皮肤损害，会出现淋巴结炎及流 感样综合征，甚而并发病毒性脑炎。发病部位主要是皮肤、淋巴，相关症状为 口咽部水疱状损害、疲劳、肌痛、疱疹，同时也会带来头痛的并发疾病，对人 体健康具有重要危害，因此 B 疱疹病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有 着重要作用。本公司在自己开发的技术基础上开发了简单快捷的 B 疱疹病 毒双染料 LAMP 试剂盒，它具有下列特点：

1. 一般 60 分钟内出结果（取决于靶分子浓度），比 PCR 快约 1 小时。

2. 对 20 μL 的反应体系，大样品加样量达到 14 μL。

3. 含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果， 也可用荧光 PCR 仪进行实时荧光检测。

4. 内含的 dUTP-UNG 可防交叉污染。

5. 特异性比 PCR 高，因为 LAMP 扩增使用 4-6 条引物而不是两条。

6. 假阴性率低。

7. 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。

8. 只可用于科研，只可进行定性检测，不能用于定量检测。

9. 本产品只适用于 LAMP 检测，不适用于进行 RT-LAMP 检测。

10. 本产品足够 50 次 20 μL 体系的 LAMP 扩增和检测反应。

疱疹病毒LAMP试剂盒规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照单独放置，不要污染其 他试剂。 

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼 容。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个样品制备，包括一个样品制备阳性对 照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。样品使用量根据所选择的试剂 盒决定。如果样品使用量为 XmL，则在 XmL 水中加 10 μL 试剂盒提供的 阳性对照（1 万拷贝），样品制备阴性对照是直接用 X mL 水作为阴性对照， 然后和 N 个样品一起进行 DNA 提取操作，得到 N+2 个 DNA 样品。

二、双染料 LAMP 扩增及检测（20μL 体系）

3. 反应设置：如果有 N+2 个 DNA 纯化样品，则设置 N+4 个 LAMP 扩 增，增加 LAMP阴性对照和 LAMP 阳性对照各1个。在 N+4个 0.2mL PCR 管中加入下列成分：

4. 置混匀后进行扩增。由于本产品含双染料，可以根据实验室条件选择下列 两种方式进行扩增和检测。

5. 如果使用金属浴或水浴，则必须先在每个反应管中加 30 μL 石蜡油，否则 保温期间反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。65℃保温 120 分钟。

6. 如果使用荧光定量 PCR 仪：设聚合温度 65℃，1 次循环 1 分钟，120 个 循环，每分钟在 FAM 通道采集一次荧光信号。

三、结果分析及解读

7. 如果是用水浴或金属浴进行的扩增，反应结束后只能肉眼判断结果。将反 应管放置在白色背景（如白纸）前观察。扩增阳性对照管内反应液将呈现 蓝色，无模板和无引物的阴性对照将呈浅蓝色。如果扩增阳性对照管内反 应液不呈现蓝色，或无模板和无引物的阴性对照任何一个呈现蓝色，则说 明试剂有问题，实验无效。请跟厂家联系。

8. 如果实验有效，则样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明有扩增，如果 接近无模板和无引物的阴性对照，则说明无扩增。反应结果示例如下（9 为阴性，10 为阳性）：

9. 反应结束后，如是用荧光 PCR 仪扩增，则可分析扩增曲线和 Ct。试剂盒 提供的阳性对照的 Ct 将小于 60，如果大于 60，说明试剂可能失效，需跟 厂家联系。无模板阴性对照和无引物阴性对照的 Ct 将大于 120。如果任 何小于 60，则说明试剂或环境被污染，需重复实验或跟厂家联系。如果对 照结果正常，说明实验有效，再分析样品。样品的 Ct 在 60 以下的为阳性， 90 以上的为阴性，60-90 之间的为疑难样品，需要重复一次，如果还在 60-90，需要电泳检测。

10. 当实时荧光检测和可视化检测同时使用时，如果不一致，以实时荧光 LAMP 的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果 20-30 分钟，也就是 说，在 qPCR 仪上第 30 分钟时呈现阳性的样品，其颜色变化在第 50-60 分钟时才能观察到。