相关文章

Articles

产品展示/ Product display

您的位置:首页  /  产品展示  /  PCR试剂盒  /  PCR-染料法  /  50次巴贝斯属虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

巴贝斯属虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

巴贝斯属虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-23
  • 访  问  量:362
立即咨询

联系电话:15221858802

详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0092
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

巴贝斯属虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

Babesia spp.

产品及特点

巴贝斯虫病,是由巴贝斯虫引起的人的血液原虫病,是一种人畜共患病。自 1957 年 Skrabalo 和 Deanovic 在南斯拉夫报告个人体病例以来,截止 1984 年, 报道人的病例已超过 100 例。早期报道的欧洲病例大多数是由于其它原因切除了脾 脏而引起的,其症状较为严重,常为致命性的。因此巴贝斯属虫的快速准确鉴定有着 重要作用。本公司开发巴贝斯属虫通用染料法荧光定量 PCR 试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。

2. 引物根据巴贝斯属虫专一区设计,特异性高。

3. 荧光定量 PCR 检测,比常规 PCR 更加灵敏。

4. 一管式闭管操作,降低了交叉污染。

5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。

6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。

巴贝斯属虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

巴贝斯属虫通用染料法 PCR 引物混合物

100 μL(白盖)

试剂四

巴贝斯属虫通用染料法 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL)

50 μL(红盖)

试剂

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输、-20℃保存,有效期一年。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)

1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万 不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DNA 段作为阳性对 照。

2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。

4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得), 充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分 震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

8. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照), 一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 上步制备的 PCR 阳性对照的第 4 号(浓度为 1×10E4 拷贝/μL,10μL 相当于 1 万拷贝)或第 5 号(浓度为 1×10E5 拷贝/μL,10μL 相当于 10 万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求 的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。如果每次制备需要 200μL 样品, 则 PC 和 NC 的体积也必须是 200μL。

9. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。

三、设置 qPCR 反应(20 μL 体系,在样品制备室进行)

10. 如果只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个 样品,1 个用于 PCR 阴性对照,6 个用于 PCR 阳性对照。如果做 2-3 次重复,则 反应设置数量相应增加 2 或 3 倍。

11. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕 后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后后加):

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

PCR 阳性 对照管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix (棕色管) 

10 μL

10 μL

各 10 μL

巴贝斯属虫通用染料法 PCR 引物混合液(白盖)

2 μL

2 μL

各 2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2 待测样品 cDNA 模板 

6 μL

 

 

第 7 步所得标准曲线样 品稀释液(2-7 号)

 

 

各 6μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…)

12. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 优化)。

过程

温度

时间

预变性

95℃

 5 min

 

PCR 反应

30 个循环

95℃

15 sec

60℃

1 min,(采集 SYBR 通道的荧光信号)

按仪器预设程序进行熔解曲线分析

四、数据处理

13. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵 轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 cDNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

14. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等 于 36。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 35 则为阴性,如果小于或等于 30 则为 阳性。如果在 30-35 之间,则重复一次。若重复结果 Ct 值小于 35,扩增曲线有 明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。

留言询价

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
上海信裕生物科技有限公司
服务热线:021-60526354
扫码关注我们
Copyright © 2024 上海信裕生物科技有限公司 版权所有   备案号:沪ICP备13033103号-10 技术支持:化工仪器网   管理登陆   sitemap.xml
15221858802