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羊边界病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

羊边界病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒会引起鲍病毒病,危害的主要对象是我国 南方养殖的九孔鲍、杂色鲍,北方地区养殖的皱纹盘鲍。该病潜伏期短,发病急,传染 性强,死亡率高,造成鲍种苗及成鲍的大量死亡,4~30d 内死亡率高达 95%以上,溶 藻胶弧菌和副溶血弧菌可能会和病毒共同感染鲍并且是鲍病的共同致病因子。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-24
  • 访  问  量:291
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0126
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

羊边界病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

Border Disease Virus(BDV)

产品及特点

羊边界病病毒(Border Disease VirusBDV)会引起羊边界病,是新生羔羊以身体多毛生长不良和神经异常为主要特征的一种先天性传染病。边界病病毒的临诊表现主要取决于宿主的年龄。临诊疾病限于在怀孕期受到感染的新生或年幼羔羊。如一个羊群受到感染时,主要表现在繁殖季节不孕或流产增多,流产可发生于怀孕的任何时期,但以怀孕后90天左右为多。由于胎儿的严重畸型导致脊柱后侧凸或关节变曲而表现为难产。边界病病毒呈世界性分布,大多数饲养绵羊国家都有本病的报道,因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品基于PCR原理开发。它具有下列特点:

1.一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2.根据羊边界病病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测,灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍,可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术,RT和PCR两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于临床。

羊边界病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

成  份

规格

试剂一

2×qRT-PCR 缓冲液

500 μL(棕色管)

试剂二

10×qRT-PCR酶混合液

100 μL(红盖)

试剂三

 ROX染料I

50 μL(棕色管)

试剂四

ROX染料II

50 μL(棕色管)

试剂五

荧光PCR模板稀释液

1mL(亮黄盖)

试剂六

羊边界病病毒RT-PCR引物混合液

100 μL(白盖)

试剂七

羊边界病病毒RT-PCR阳性对照

(1×10E8拷贝/μL

50 μL(黄盖)

试剂八

天净沙核酸释放剂试用装

20次(1mL,绿盖)

试剂九

使用手册

1份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供DNA段作为阳性对照。

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、稀释阳性对照(以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。用带芯枪头分别加入45 μL 荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
2.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(本试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
3.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
4.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
5.如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×10E4拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
6.用自选方法纯化N+2个样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。
三、设置RT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
7.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液做模板)。下面只描述定量分析的步骤,定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个,其余不变。
8.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后后加): 

成分

N+2制备所得样品

RT-PCR阴性对照

RT-PCR阳性

对照(2-7管)

2×qRT-PCR 缓冲液

10μL

10μL

各10μL

羊边界病病毒RT-PCR

引物混合物

2μL

2μL

2μL

50×ROX (见注)

0.4μL

0.4μL

各0.4μL

 样品制备所得RNA模板(来于8

5.6μL

不加

不加

稀释所得6个阳性对照(来于第6步)

不加

不加

5.6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

10×qRT-PCR

酶混合液

2μL

2μL

2μL

9.上机后按下面参数进行RT-PCR(参数可能会因仪器不同而需优化)。

过程

温度

时间

RT逆转录

50℃

15-30分钟

预变性

94℃

2分钟

RT - PCR反应

30个循环)

95℃

15 秒

60

15 秒(采集FAM通道的荧光信号

72

15 秒

仪器预设程序进行溶解曲线分析

四、数据处理
10.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
11.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

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