牛冠状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

牛冠状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

Bovine Coronavirus(BCoV)

产品及特点

牛冠状病毒（Bovine Coronavirus，BCoV）属于冠状病毒科，冠状病毒属 2a 亚群，是引起新生犊牛腹泻、成年牛冬痢和呼吸道感染的重要病原。流行病学 调查表明，牛冠状病毒在牛场中普遍存在，主要通过消化道和呼吸道传播，感染 的牛长期带毒并在一定时期内持续排毒，易造成牛群的大范围感染。因此，对带 毒牛的及时检出和牛场环境监测就显得尤为重要。本产品就是专门用于牛冠状病 毒的快速荧光 RT-PCR 检测的试剂盒，在毒牛或牛场环境的检测领域有广泛用 途，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 使用 RNase H 已经突变的 SuperMMLV 逆转录酶，减少了 RT 过程中 RNA 的降解。

3. 使用热启动的 Taq DNA 聚合酶，降低了非特异性扩增。

4. 荧光定量检测，所含 SYBR Green I 只与双链 DNA 结合，反应特异性强。适 用于不需要 ROX 做校正染料的荧光 PCR 仪。

5. 产品的有效线性范围广，定量更加准确。

6. 引物经过优化，特异性高，不会误检牛轮状病毒（BRV）、牛病毒性腹泻病毒 （BVDV）和牛流行热病毒（BEFV）等常见牛类病毒。

7. 引物是根据保守的 N 基因设计，产物长度为 100 bp。 

牛冠状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。 

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备 用自选方法纯化 BCoV 样品的 RNA，

二、RT（逆转录）反应合成 cDNA 按照下表配制 RT 反应体系（20 uL 体系）： 成份 用量 RNA 模板（自备） 由于一般不知病毒RNA浓度,用1-10 uL即可 BCoV 专一性引物二 2 uL RNase-free 水 补水到 13 uL 70℃保温 5 min 变性模板后立即冰浴。 RT Buffer(含 dNTP) 5 uL 37℃保温 5 min。 SuperMMLV 逆转录酶 2 uL 42℃保温 60 min。此步为 RT 反应。 70℃保温 10 min 以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以 直接作为 PCR 模板使用，不需要纯化

三、设置荧光 PCR 反应（50 uL 体系）1. 配制 8-10 个浓度范围的标准品：用 DNA 稀释液将 BCoV 标准品稀释成 8-10 个浓度，待用。 2. 在 PCR 管中加入下列成分（N 跟据稀释度由客户自己决定）： 

3. 上机进行 PCR。荧光定量 PCR 反应参数为（以 ABI7500 荧光定量 PCR 仪 为参考）:

4. 根据 8-10 个标准品的 Ct 值（X 轴）和浓度（X 轴）描出标准曲线，用待测 样品 Ct 值推出其浓度。