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牛冠状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

牛冠状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒会引起鲍病毒病,危害的主要对象是我国 南方养殖的九孔鲍、杂色鲍,北方地区养殖的皱纹盘鲍。该病潜伏期短,发病急,传染 性强,死亡率高,造成鲍种苗及成鲍的大量死亡,4~30d 内死亡率高达 95%以上,溶 藻胶弧菌和副溶血弧菌可能会和病毒共同感染鲍并且是鲍病的共同致病因子。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-24
  • 访  问  量:310
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0134
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

牛冠状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

Bovine Coronavirus(BCoV)

产品及特点

牛冠状病毒(Bovine Coronavirus,BCoV)属于冠状病毒科,冠状病毒属 2a 亚群,是引起新生犊牛腹泻、成年牛冬痢和呼吸道感染的重要病原。流行病学 调查表明,牛冠状病毒在牛场中普遍存在,主要通过消化道和呼吸道传播,感染 的牛长期带毒并在一定时期内持续排毒,易造成牛群的大范围感染。因此,对带 毒牛的及时检出和牛场环境监测就显得尤为重要。本产品就是专门用于牛冠状病 毒的快速荧光 RT-PCR 检测的试剂盒,在毒牛或牛场环境的检测领域有广泛用 途,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 使用 RNase H 已经突变的 SuperMMLV 逆转录酶,减少了 RT 过程中 RNA 的降解。

3. 使用热启动的 Taq DNA 聚合酶,降低了非特异性扩增。

4. 荧光定量检测,所含 SYBR Green I 只与双链 DNA 结合,反应特异性强。适 用于不需要 ROX 做校正染料的荧光 PCR 仪。

5. 产品的有效线性范围广,定量更加准确。

6. 引物经过优化,特异性高,不会误检牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)和牛流行热病毒(BEFV)等常见牛类病毒。

7. 引物是根据保守的 N 基因设计,产物长度为 100 bp。 

牛冠状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

成  份

规格

试剂一

SuperMMLV 逆转录酶

100 uL

试剂二

RT Buffer(含 dNTP) 

250 uL

试剂三

 2×荧光 PCR Mix

1.5 mL

试剂四

BCoV 专一性引物一 

100 uL 

试剂五

BCoV 专一性引物二

100 uL 

试剂六

BCoV 标准品 (1.16×10E11 拷贝/uL) 

40uL

试剂七

DNA 稀释液 

10mL

试剂八

RNase-free 水

1 mL

试剂九

使用手册

1份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。 

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备 用自选方法纯化 BCoV 样品的 RNA,

二、RT(逆转录)反应合成 cDNA 按照下表配制 RT 反应体系(20 uL 体系): 成份 用量 RNA 模板(自备) 由于一般不知病毒RNA浓度,用1-10 uL即可 BCoV 专一性引物二 2 uL RNase-free 水 补水到 13 uL 70℃保温 5 min 变性模板后立即冰浴。 RT Buffer(含 dNTP) 5 uL 37℃保温 5 min。 SuperMMLV 逆转录酶 2 uL 42℃保温 60 min。此步为 RT 反应。 70℃保温 10 min 以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以 直接作为 PCR 模板使用,不需要纯化

三、设置荧光 PCR 反应(50 uL 体系)1. 配制 8-10 个浓度范围的标准品:用 DNA 稀释液将 BCoV 标准品稀释成 8-10 个浓度,待用。 2. 在 PCR 管中加入下列成分(N 跟据稀释度由客户自己决定): 

成分

样品

标准品 (8-10 管) 

阴性对照

2×qPCR Mix

25 uL

25 uL

25 uL

cDNA 样品(上步的 RT 反应液) 

1-5 uL

 

 

标准品(8-10 个浓度) 

 

N uL 每管

 

 BCoV 专一性引物一

2 uL

2 uL

2 uL

BCoV 专一性引物二

2 uL

2 uL

2 uL

1补水到

50 uL 

50 uL 

50 uL 

3. 上机进行 PCR。荧光定量 PCR 反应参数为(以 ABI7500 荧光定量 PCR 仪 为参考):

过程

温度

时间

预变性(此步用于活化热启动 Taq 聚合酶) 

95℃ 

30 s

RT - PCR反应

30个循环)

95℃

5 s

60

30 s 

72

10 min

4. 根据 8-10 个标准品的 Ct 值(X 轴)和浓度(X 轴)描出标准曲线,用待测 样品 Ct 值推出其浓度。 

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