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犬细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

犬细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-28
  • 访  问  量:310
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0183
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

犬细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

Canine Parvo Virus(CPV)

产品及特点

犬犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)在分类上属细小病毒属细小病毒科,是一 种单链 DNA 病毒。CPV 是感染犬、猫、狼、狐等动物并引起细小病毒病,感染率高达 100%,致死率 10-50%。PCR 是目前检测 CPV 的方法,本产品就是定性 PCR 产品(产品编号 11-150)基础上升级的定量 PCR 检测试剂盒,专门用于定量鉴定检 测 CPV。本试剂盒具有下列特点:

1. 根据 CPV 衣壳蛋白基因 VP2 设计的针对 CPV 的 PCR 引物,专一性强。

2. 即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。

3. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。

4. 本试剂盒足够 100 次 20uL 反应体系的荧光定量 PCR。

5. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。 

犬细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×qPCR MagicMix

1 mL×2(装 A 袋)

试剂二

超纯水 

1 mL×2(装 A 袋)

试剂三

引物 14-15000F

1 OD(装 B 袋)

试剂四

引物 14-15000R 

1 OD(装 B 袋)

试剂五 犬细小病毒 VP2 基因阳性对照 (10E8copy/μL) 50 μL(装 C 袋)

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输、-20℃保存(A 袋和 B 袋的试剂放样品准备区、C 袋的阳性对照跟 A 袋 和 B 袋的成分分开放置),有效期一年。 

自备试剂  DNA 模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容,也可以选购本公司的柱式病毒 DNAout。

二、引物的制备(在样品制备室进行)

2. 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水(加入量见引物试管上 的标签),使得两条引物的浓度均为 10 μM(10pmol/μL),然后各取 110 μL 混合在一起,标注为引物混合物,放冰上待用。此引物混合物足够 100 次 PCR。

三、稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于阳性对照浓度非常 高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他 成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照, 只提供可以直接使用的长为 180bp 的 DNA 段作为阳性对照。

3. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

4. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。

5. 在 7 号管中加入 5 μL 本试剂盒提供的 10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得 10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分 震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/ μL 的阳性对照。放冰上待用。

8. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,得 10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放 冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

三、设置 PCR 反应(20 μL 体系,在样品制备室进行)

9. 在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次。样品管 和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子 储存好后后加): 

成分

样品

阴性对照

阳性对照(2-7 管) 

2×qPCR MagicMix (

10 μL

10 μL

各 10 μL

引物混合物 

2 μL

2 μL

各 2 μL

自备 10×ROX (见注)

  2 μL 

 2 μL 

各 2 μL  

待测样品 DNA 模板

 1-5 μL

 

 

 阳性对照(2-7 号)   各 5μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…)
补水到  20 μL 20 μL 20 μL

10. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(可以根据仪器不同而自行优化)。

过程

温度

时间

预变性

94℃

2 分钟 

 

PCR 反应 (40 个循环) 

94℃

15 秒

60℃

30 秒 

11. 数据采集 在每个循环的第二步进行荧光信号的采集,具体操作按所用仪器推荐的流程进行。 本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时,大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的大吸收光谱在 500 nm,大发射光谱在 530 nm。

四、数据处理

12. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品 浓度的 log 和标准曲线计算出样品 DNA 的浓度。 

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