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艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-29
  • 访  问  量:305
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0209
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

Clostridium difficile

产品及特点

艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile)属厌氧性细菌,一般寄生在人的肠道内。如果过度服用某些抗生素,艰难梭菌的菌群生长速度加快,影响肠道中其他细菌,引发炎症。该细菌会引起伪膜性肠炎,临床表现为腹泻、腹痛、伴有全身中毒症状,症状突然开始,并伴随血压低,严重时能致死。通常还伴有发烧,白细胞增多,之后可导致死亡,是很严重的一类疾病。该细菌还会引起抗生素相关性腹泻,在体内的潜伏期为5-10天,之后导致大量的棕色或水状腹泻,持续1周左右。除上述疾病外,艰难梭菌尚可引起肾盂肾炎、脑膜炎、腹腔及阴道感染、菌血症和气性坏疽等。近年来该菌已成为医院内感染的病原菌之一,日益被人们所重视因此快速检测艰难梭状芽孢杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测艰难梭状芽孢杆菌的试剂盒,它具有下列特点:

1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
2.引物和探针经过优化,灵敏性高。
3.提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4.特异性高,引物是根据人艰难梭状芽孢杆菌高度保守的VP1区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
6.本产品只能用于科研。

艰难梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(本色盖)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

艰难梭状芽孢杆菌PCR引物

100 μL(白盖)

试剂四

艰难梭状芽孢杆菌qPCR探针

100 μL(棕色管)

试剂五 

艰难梭状芽孢杆菌阳性对照2.0

(1×10E8拷贝/μL)

 

50 μL(红

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输、-20℃保存,有效期一年。

自备试剂  DNA 模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。

使用方法 一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。 由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,用带芯枪头, 下同)。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震 荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 如果有 N 个样品,好设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼 容。

三、Probe qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个 用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用 水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模 板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。 10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后后加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×Probe qPCR MagicMix(本色盖)

10 μL

10 μL

各10 μL

艰难梭状芽孢杆菌 qPCR探针(绿

2 μL

2 μL

各2 μL

艰难梭状芽孢杆菌 PCR引物混合液(白

2 μL

2 μL

2 μL

 待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7

不加

不加

6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

PCR反应

40个循环)

94

0.5 min

50

0.5 min(采集FAM通道的荧光信号

72℃

0.5 min

后延伸

72

  • min

数据处理

  • 以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,推算出其浓度

六、电泳检测

如果必要电泳确认,可取10-20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400 bp。但电泳非常容易污染实验

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