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您的位置:首页  /  产品展示  /  PCR试剂盒  /  PCR-染料法  /  50次脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒

脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒

脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-30
  • 访  问  量:398
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0264
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒

Encephalomyocarditis Virus(EMCV)

产品及特点

脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis Virus,EMCV)在分类上属小 RNA 病毒科,心肌病毒属,是一种无囊膜的单股正链 RNA 病毒。由 EMCV 引 起 的猪脑心肌炎是猪的一种以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染 病,给养猪业造成了的经济损失。本产品适用于检测猪血清、脑、心肌以及 淋巴结等组织标本或病毒培养液中 EMCV 的 mRNA,适用于 EMCV 感染的 辅助诊断。它具有下列特点: 

1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2. 根据 EMCV 的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 30uL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。

脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

成  份

规格

试剂一

2×双酶一管式 RT-PCR Buffer

750 uL(黄盖) 

试剂二

MMLV-Taq Mix

100 uL(红盖)

试剂三

超纯水 

1 mL(本色盖)

试剂四

EMCV RT-PCR 引物混合液 

各 0.5 OD(白盖)

试剂五

EMCV PCR 阳性对照 

50 uL(黄盖)

试剂六RNA 病毒裂解液(试用装) 10mL 
试剂七

使用手册 

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。  

自备试剂 样品 RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 11.5μL EMCV PCR 阳性 对照的 10000 倍稀释的(稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL,10μL 相当于 1 万拷贝,可以将 10uL 原液加入到 990uL 自备 TE 溶液中,充分混匀,此为 100 倍稀释液。再取 10uL 此稀释液加入到 990uL 自备 TE 溶液中,充分混 匀,此为 10000 倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后 其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作 为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。 

二、设置 RT-PCR 反应(30uL 体系) 3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:

成分

样品

阳性对照

阴性对照

2×双酶一管式 RT-PCR Buffer

各15 uL

15 uL

15 uL

EMCV RT-PCR 引物混合液

2μL

2μL

2μL

样品 RNA(N+2 个) 

11.5 uL

 

 

 EMCV RT-PCR 阳性对照 10000 倍稀释液 

 

11.5 uL

 

MMLV-Taq Mix

1.5 uL

1.5 uL

1.5 uL

4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为: 

过程

温度

时间

逆转录 

42℃

30 分钟

预变性

94℃  

2 分钟

PCR 反应 (35 个循环)

94℃ 

30 秒

56℃  

30 秒 

72

30 秒  

 延伸  72 5 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果,阳性样品预期得到的扩增产物长度为 286bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物,则说明实验失败,需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有此扩增产物则为阳性, 如果无则为阴性

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