脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。
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品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0264 |
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规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒
Encephalomyocarditis Virus(EMCV)
产品及特点
脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis Virus,EMCV)在分类上属小 RNA 病毒科,心肌病毒属,是一种无囊膜的单股正链 RNA 病毒。由 EMCV 引 起 的猪脑心肌炎是猪的一种以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染 病,给养猪业造成了大的经济损失。本产品适用于检测猪血清、脑、心肌以及 淋巴结等组织标本或病毒培养液中 EMCV 的 mRNA,适用于 EMCV 感染的 辅助诊断。它具有下列特点:
1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据 EMCV 的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 30uL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
脑心肌炎病毒RT-PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成 份 | 规格 |
试剂一 | 2×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 750 uL(黄盖) |
试剂二 | MMLV-Taq Mix | 100 uL(红盖) |
试剂三 | 超纯水 | 1 mL(本色盖) |
试剂四 | EMCV RT-PCR 引物混合液 | 各 0.5 OD(白盖) |
试剂五 | EMCV PCR 阳性对照 | 50 uL(黄盖) |
试剂六 | RNA 病毒裂解液(试用装) | 10mL |
试剂七 | 使用手册 | 1 份) |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂 样品 RNA
使用方法 一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 11.5μL EMCV PCR 阳性 对照的 10000 倍稀释的(稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL,10μL 相当于 1 万拷贝,可以将 10uL 原液加入到 990uL 自备 TE 溶液中,充分混匀,此为 100 倍稀释液。再取 10uL 此稀释液加入到 990uL 自备 TE 溶液中,充分混 匀,此为 10000 倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后 其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作 为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。
二、设置 RT-PCR 反应(30uL 体系) 3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 | 样品 | 阳性对照 | 阴性对照 |
2×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 各15 uL | 15 uL | 各15 uL |
EMCV RT-PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
样品 RNA(N+2 个) | 11.5 uL |
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EMCV RT-PCR 阳性对照 10000 倍稀释液 |
| 11.5 uL |
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MMLV-Taq Mix | 1.5 uL | 1.5 uL | 1.5 uL |
4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
过程 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 42℃ | 30 分钟 |
预变性 | 94℃ | 2 分钟 |
PCR 反应 (35 个循环) | 94℃ | 30 秒 |
56℃ | 30 秒 | |
72℃ | 30 秒 | |
延伸 | 72℃ | 5 分钟 |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果,阳性样品预期得到的扩增产物长度为 286bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物,则说明实验失败,需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有此扩增产物则为阳性, 如果无则为阴性
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