溶组织内阿米巴染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。
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品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0266 |
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规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
溶组织内阿米巴染料法荧光定量PCR试剂盒
Entamoeba histolytica
产品及特点
阿米巴原虫由于生活环境不同可分为内阿米巴和自由阿米巴,前者寄生于人和动 物,后者生活在水和泥土中,偶尔侵入动物机体。对人类危害大的是属于内阿米巴属 的溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica),它会引发阿米巴痢疾和肝脓肿,引发 的病例多,感染面广,危害大。因此对溶组织内阿米巴进行快速灵敏的诊断具有重要的 意义。本产品就是根据溶组织内阿米巴 rRNA 编码基因的保守区设计引物而开发的高灵 敏荧光定量 PCR 产品。本试剂盒具有下列特点:
1. 根据溶组织内阿米巴 rRNA 编码基因保守序列设计的专一性引物,与其他肠道疾病 病原体 无交叉反应。
2. 灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级,可以达到几十拷贝/反应。
3. 即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 100 次 20uL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
溶组织内阿米巴染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 2×PCR MagicMix | 0.5 mL(装 A 袋) |
试剂二 | 超纯水 | 1 mL(装 A 袋) |
试剂三 | 溶组织内阿米巴 PCR 引物 F | 0.5 OD(装 B 袋) |
试剂四 | 溶组织内阿米巴 PCR 引物 R | 0.5 OD(装 B 袋) |
试剂五 | 溶组织内阿米巴基因阳性对照 (1×10E8 copy/μL) | 50 μL(装 C 袋) |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存(A 袋试剂放样品准备区、C 袋的阳性对照分开放置),有效期 一年。
自备试剂 DNA 模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数原虫 DNA 提取试剂盒兼 容。本公司的柱式粪便 DNA 提取试剂盒也可以用于隐孢子虫 DNA 提取。 二、引物的制备(在样品制备室进行)
2. 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水(加入量见引物试管上 的标签),使得两条引物的浓度均为 10μM(10pmol/μL),然后各取 110μL 混 合在一起得 220μL,标注为引物混合物,放冰上待用。220μL 足够 100 次 qPCR 反应。
三、稀释阳性对照
(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高, 因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成 分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照, 只提供可以直接使用的长为 150bp 的 DNA 段作为阳性对照。
3. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
4. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
5. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得), 充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震 荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
8. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得 1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
9. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
三、设置 qPCR 反应(20 μL 体系,在样品制备室进行)
10. 在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次。样品管 和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子 储存好后后加):
成分 | 样品 | 阴性对照 | 阳性对照(2-7 管) |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
引物混合物 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
待测样品 DNA 模板 | 1-5 μL |
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阳性对照(2-7 号) | 各 5μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…) | ||
补水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 优化)。
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 3 分钟 |
PCR 反应 (45 个循环)) | 95℃ | 30 秒 |
55℃ | 30 秒 | |
72℃ | 30 秒 |
12. 数据采集 具体操作按所用仪器推荐的流程进行。一般在复性步骤采集荧光数据。本产品中所 含的荧光染料在不结合 DNA 时,大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的大 吸收光谱在 500 nm,大发射光谱在 530 nm。
四、数据处理
13. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品 的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。
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