流行性出血热病毒RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。
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品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0282 |
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规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
流行性出血热病毒RT-PCR试剂盒
Epizootic Hemorrhagic Disease Virus(EHDV)
产品及特点
出血热即流行性出血热又称肾综合征出血热,是危害人类健康的重要传染病, 是由流行性出血热病毒(Epizootic Hemorrhagic Disease Virus,EHDV)引 起的,主要传播为动物源性,病毒能通过宿主动物的血及唾液、尿、便排出,鼠 向人的直接传播是人类感染的重要途径。以发热、出血、充血、低血压休克及肾 脏损害为主要临床表现。本产品根据 PCR 原理开发,可用于科研领域快速检测 流行性出血热病毒。它具有下列特点:
1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据流行性出血热病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
流行性出血热病毒RT-PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成 份 | 规格 |
试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL(橘黄盖) |
试剂二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL(红盖) |
试剂三 | 超纯水 | 1 mL(亮黄盖) |
试剂四 | 流行性出血热病毒 RT-PCR 引物 混合液 | 100 μL(白盖) |
试剂五 | 流行性出血热病毒 RT-PCR 阳性 对照(1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL(黄盖) |
试剂六 | 天净沙核酸释放剂(试用装) | 20 次(1mL,绿盖) |
试剂七 | 使用手册 | 1 份) |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂 样品 RNA
使用方法 一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 流行性出血热病毒 PCR 阳性对照的 100 倍稀释作为制备的阳性对照;用水作为制备的阴性对照。 制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。
二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)
3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 | 样品 | 阳性对照 | 阴性对照 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 各 4 μL | 4 μL | 4 μL |
流行性出血热病毒 RT-PCR 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
N+2 个制备的 RNA 样品 | 各12.5 μL |
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超纯水 |
| 12.5 μL |
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流行性出血热病毒 RT-PCR 阳性对照 的 100 倍稀释液 | L |
| 12.5 μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
过程 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 42℃ | 30 min |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) | 95℃ | 30 sec |
55℃ | 30 sec | |
72℃ | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 7 min |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物, 则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有 122bp 预期的扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果, 如果有扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。
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