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埃希氏菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

埃希氏菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-31
  • 访  问  量:321
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0297
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

埃希氏菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

Escherichia spp.

产品及特点

大肠埃希氏菌,俗称大肠杆菌(Escherichia coli),属于革兰氏阴性细菌。 大肠杆菌 O157:H7 是肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC)的见类型,O 表示抗原类型, H7 表示血清型。其感染剂量极低, 人体只要摄入 10 个细菌就可以致病,目前还没有*疫苗,因此大量开展预防 检测工作具有重要的意义。目前对 O157 的检测主要是传统分离培养、免疫学 和分子水平的 PCR 检测。本试剂盒就是利用实时荧光定量 PCR 技术开发的大 肠杆菌 O157:H7 检测试剂盒,它通过荧光染料实时显示样品模板 DNA 的量, 并通过坐标曲线表示出来,结果直观准确。它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。

2. 荧光定量 PCR 检测,反应特异性强。

3. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。 

埃希氏菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

1.0 mL

试剂二

O157:H7 专一性引物对

200 μL

试剂三

O157:H7 阳性对照, 1.3×10E9 拷贝/μL

10 μL

试剂四

超纯水 

1 mL 

试剂

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

自备试剂   样品等

使用方法 一、样品 DNA 的制备 用自选方法提取细菌样品 DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的 关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检 测灵敏度。

二、制备 O157:H7 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标 准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样 品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品 不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 段 作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。

3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到 10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7 拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。

4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 O157:H7 阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。

5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。

6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。

7. NC 管中不加任何阳性对照。

8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个 样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值, 并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。

三、PCR 检测(20 μL 体系)

1. 在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次)

成分

样品管 N+2 个

阴性 对照

阳性对照

2×qPCR Mix

10 μL

10 μL

 10 μL

待测样品 DNA 模板

1-5 μL

 

 

O157:H7 阳性对照 

 

 

5 uL(每个 管加一个 稀释度的 对照)

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL 

 2 μL

O157:H7 专一性引物对 2 μL 2 μL 2 μL

补水到

20 μL 

20 μL 

20 μL

2. 建议 PCR 反应参数(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行优化) 

过程

温度

时间

预变性

95℃

10 min

 

PCR 反应

(40 个循环

94℃ 

15 sec

60℃

30 s

3. 数据采集

具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时,大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的大吸收光谱在 500 nm, 大发射光谱在 530 nm。

四、数据处理

以 O157:H7 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲 线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值 计算出样品 DNA 的浓度。 

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