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链球菌B组染料法荧光定量PCR试剂盒

链球菌B组染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-31
  • 访  问  量:360
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0310
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

链球菌B组染料法荧光定量PCR试剂盒

Group B Streptococcus spp.(GBS)

产品及特点

链球菌B组(Group B Streptococcus spp, GBS)能引起牛乳房炎,严重危害畜牧业,因此早期被畜医界重视。经过几十年的研究,发现B族链球菌还可引起新生儿败血症、肺炎、脑膜炎,甚至死亡。在感染后存活的新生儿,还有可能有严重的神经系统后遗症,包括脑积水、智力障碍、小头畸形、耳聋等。同时,B族链球菌还可引起孕妇感染、引起早产、胎儿发育不良(低体重儿)、胎膜早破及晚期流产,因此快速检测链球菌B组具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测链球菌B组的试剂盒,它具有下列特点:

1.即开即用,用户只需要提供DNA模板。
2.特异性高,引物是根据人链球菌B组高度保守区设计,不会扩增其他细菌。
3.引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规PCR高100倍。
4.提供无传染性的PCR阳性对照,便于区分假阴性样品。
5.一管式操作,荧光PCR检测,不容易产生环境污染。
6.本产品只能用于科研,本试剂盒足够50次20μL体系的PCR。

链球菌B组染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

链球菌B组 qPCR 引物混 合液

100 μL(白盖)

试剂四

链球菌B组 qPCR 阳性对 照(1×10E8 拷贝/μL)

50μL(红盖)

试剂 

天净沙核酸释放剂试用装

 

20次(1mL,绿盖)

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

自备试剂   样品 DNA。

使用方法 一、制备标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DN段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
3.在7号管中加入5 μL 阳性对照(其浓度为1×10E8拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.用自选方法纯化样品的DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有N个样品,则需要进行N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果进行定量分析,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。
10在标记管中按下表加入各成分:

成分

N+2

样品管

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各10 μL

链球菌B组 PCR引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

自备10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各2 μL

 N+2个待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

自备超纯水

不加

6 μL

不加

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7

不加

不加

6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

PCR反应

(40个循环)

94

0.5 min

55

0.5 min(采集SYBR通道的荧光信号

72℃

0.5 min

后延伸

72

  • min

四、荧光定量PCR反应参数
五、数据处理
12.设定60℃-96℃范围的融解曲线分析,排除假阳性。
13.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
14.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性

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