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戊型肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

戊型肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-08-03
  • 访  问  量:306
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0360
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

戊型肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

Hepatitis E Virus(HEV)

产品及特点

戊型肝炎(Hepatitis E )是一种经粪一口传播的急性传染病。HEV 是单股正链 RNA 病毒,呈球形、直径 27~34nm 无囊膜,核衣壳呈二十面体立体对称。戊型 肝炎病毒(HEV)为无包膜的球状颗粒,分为 1~8 共 8 个基因型,中国内地流行株 主要为 1 型(曾称缅甸株),其次为 4 型。目前尚不能对 HEV 进行细胞培养,可实 验室感染猕猴等多种猴类,HEV 对外界环境抵抗力不强。戊型肝炎传播途径(主要 经粪-口途径传播)和临床表现(隐性感染及急性肝炎,不致慢性肝炎等)与甲型肝炎 相似。戊型肝炎在 15~39 岁的青年和成人高发。戊型肝炎亦为自限性疾病。HEV 对肝细胞亦无直接病变作用(CPE)。机体于病后可获得一定的免疫力,但不够稳固。 目前无戊型肝炎疫苗,预防戊型肝炎采用切断粪-口传播途径为主的措施。本产品 是基于染料法荧光定量 PCR 原理开发,专门检测戊型肝炎病毒的试剂盒。它具有 下列特点:

1.一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2.根据戊型肝炎病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测,灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍,可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术,RT和PCR两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于临床。

戊型肝炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

 

成  份

 

 

规格

试剂一

2×qRT-PCR 缓冲液

500 μL(棕色管)

试剂二

10×qRT-PCR酶混合液

100 μL(红盖)

试剂三

 ROX染料I

50 μL(棕色管)

试剂四

ROX染料II

50 μL(棕色管)

试剂五

荧光PCR模板稀释液

1mL(亮黄盖)

试剂六

戊型肝炎病毒RT-PCR引物混合液

100 μL(白盖)

试剂七

戊型肝炎病毒RT-PCR阳性对照

(1×10E8拷贝/μL

50 μL(黄盖)

 试剂八

使用手册

1份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供RNA段作为阳性对照。

自备试剂  样品RNA

使用方法 一、稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非 常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂 盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样 品做阳性对照,只提供无传染性的的 DNA 段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。用带芯枪头分别加入 45 μL 荧 光 PCR 模板稀释液,用带芯枪头,下同)。

2. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(本试剂盒提供),充分 震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

3. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

4. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 二、样品 RNA 的制备

6. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 上步制备的阳性对照 梯度稀释液中的第 4 号(浓度为 1×10E4 拷贝/μL,10μL 相当于 1 万拷贝) 再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品 体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。

7. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。 

三、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

8. 如果只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 RT-PCR 阴性对照,6 个用于 RT-PCR 阳性对照。 9. 在标记管中按下表加入各成分: 

成分

N+2制备所得样品

RT-PCR阴性对照

RT-PCR阳性

对照(2-7管)

2×qRT-PCR 缓冲液

10μL

10μL

各10μL

戊型肝炎病毒染料法 qRTPCR 引物混合液

2μL

2μL

2μL

50×ROX (见注)

0.4μL

0.4μL

各0.4μL

 样品制备所得RNA模板(来于8

5.6μL

不加

不加

稀释所得6个阳性对照(来于第6步)

不加

不加

5.6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

10×qRT-PCR

酶混合液

2μL

2μL

2μL

9. 上机后按下面参数进行 RT-PCR(参数可能会因仪器不同而需优化)。

过程

温度

时间

RT逆转录

50℃

30 min

预变性

94℃

10 min

qPCR 反应 (40 个循环)

95℃

15 sec

60

1 min(采集 SYBR 通道的荧光信号)

仪器预设程序进行溶解曲线分析

四、数据处理 10. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于 或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于 或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等 于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。若重复结果 Ct 值小于 40,扩增曲线有明显起峰,该样本判断为阳性,否则为阴性。

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