单纯疱疹病毒1型染料法荧光定量PCR试剂盒

单纯疱疹病毒1型染料法荧光定量PCR试剂盒

Herpes Simplex Virus(HSV)

产品及特点

单纯疱疹病毒（Herpes Simple Viruses， HSV）属于疱疹病毒科 a 病毒亚科， 为双股 DNA 病毒，疱疹病毒感染的宿主范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。对人 的感染通过人与人接触传染。根据抗原性的差别目前把 HSV 分为 1 型和 2 型。1 型主 要由口唇病灶获得，2 型可从生殖器病灶分离到。从发生后四个月到数年被感染的人数 可达人口总数的 50-90%，是易感染人的一种病毒。因此对 HSV-1 的快速诊断具有 重要的意义。本产品就是根据 HSV-1 保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。本试剂盒具有下列特点： 

1. 根据 HSV-1 的 gD 基因设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。

2. 灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级，可以达到几百拷贝/反应。

3. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。

4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。

5. 本试剂盒足够 100 次 20uL 反应体系的荧光定量 PCR。

6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 

单纯疱疹病毒1型染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

运输及保存 低温运输、-20℃保存(A 袋和 B 袋的试剂放样品准备区、C 袋的阳性对照分开放置)， 有效期一年。 

自备试剂  DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数原虫 DNA 提取试剂盒兼 容。本公司的柱式粪便 DNA 提取试剂盒也可以用于隐孢子虫 DNA 提取。

二、引物的制备（在样品制备室进行）

2. 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加入量见引物试管上 的标签），使得两条引物的浓度均为 10μM（10pmol/μL），然后各取 110μL 混 合在一起得 220μL，标注为引物混合物，放冰上待用。220μL 足够 100 次 qPCR 反应。

三、稀释阳性对照

（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高， 因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成 分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照， 只提供可以直接使用的长为 150bp 的 DNA 段作为阳性对照。

3. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

4. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。

5. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

8. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中，得 1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

9. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）

10. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管 和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子 储存好后后加）： 

11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 优化）。

12. 数据采集 具体操作按所用仪器推荐的流程进行。一般在复性步骤采集荧光数据。本产品中所 含的荧光染料在不结合 DNA 时，大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的大 吸收光谱在 500 nm，大发射光谱在 530 nm。

四、数据处理

13. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品 的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。