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伊氏李斯特菌探针法荧光定量PCR试剂盒

伊氏李斯特菌探针法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-08-07
  • 访  问  量:313
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0456
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

伊氏李斯特菌探针法荧光定量PCR试剂盒

Listeria ivanovii

产品及特点

伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii)是引起人兽共患伊氏李斯特菌病的病原菌,该菌感染宿主中枢神经系统是导致高死亡率的主要原因,较容易感染的动物是绵羊,所以该菌又被称为绵羊伊氏李斯特菌,感染该病菌会给养殖业带来较大的经济损失,因此伊氏李斯特菌的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测伊氏李斯特菌的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4.特异性高,引物是根据人伊氏李斯特菌高度保守的VP1区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

6. 本产品只能用于科研。 

伊氏李斯特菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

2×Probe qRT-PCR MagicMix

500 μL(本色盖) 

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

 1 mL(黄盖)

试剂三

伊氏李斯特菌PCR引物

100 μL(白盖)

试剂四

伊氏李斯特菌qPCR探针

50 μL(棕色管)

试剂五

伊氏李斯特菌阳性对照2.0

(1×10E8拷贝/μL)

 50 μL

(红

试剂 天净沙核酸释释剂(试用装)

50次(试用装)

试剂

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。 

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。 由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 RT-PCR 模板稀释液,用带芯枪 头,下同)。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震 荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 RNA 的制备

7. 如果有 N 个样品,设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

8. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。

三、Probe qRT-PCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个 用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用 水做模板),1 个用于 PCR 阳性对照(用第 4 号管的阳性对照稀释液做模 板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。

10. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好 后后加): 

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×Probe qPCR MagicMix(本色盖)

10 μL

10 μL

各10 μL

伊氏李斯特菌 qPCR探针(绿

2 μL

2 μL

各2 μL

伊氏李斯特菌 PCR引物混合液(白

2 μL

2 μL

2 μL

 待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7

不加

不加

6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

PCR反应

40个循环)

94

0.5 min

50

0.5 min(采集FAM通道的荧光信号

72℃

0.5 min

后延伸

72

  • min

 

五、数据处理
12.以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
六、电泳检测
13.如果有必要电泳确认,可取10-20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400 bp。但电泳非常容易污染实验环境,建议不轻易采纳。

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