绵羊疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒，根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在，主要侵犯外胚层发育而成的组织，例如：皮肤、粘膜和神经组织。
产品型号：50次厂商性质：生产厂家更新时间：2020-08-10访 问 量：439
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| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0546 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
| 主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
绵羊疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒
Ovine Herpesvirus(OHV)
产品及特点
绵羊疱疹病毒(Ovine Herpesvirus，OHV) 在自然感染的情况下，主要是绵羊容易发生该病，尤其是1～4岁的绵羊比较容易发生，而老龄绵羊和幼龄绵羊相对比较少发病。病绵羊往往突然出现高热，体温升高达到41-42℃，呈稽留热，且体质迅速虚弱，接着眼、口、鼻黏膜很快出现严重炎症。双眼不停流泪，眼脸发生肿胀闭合，且有纤维素性脓性分泌物流出，角膜发生混浊，甚至形成溃疡，终导致失明。这一疾病对养羊业造成巨大危害，因此绵羊疱疹病毒通用的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用，为此本公司开发了简单快捷的绵羊疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2.根据绵羊疱疹病毒通用保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3.灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4.一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
绵羊疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 2×PCR MagicMix | 500μL（棕色） |
试剂二 | 荧光 PCR 模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
试剂三 | 绵羊疱疹病毒通用PCR 引物混 合液 | 100 μL（白盖） |
试剂四 | 绵羊疱疹病毒通用PCR 阳性对 照(1×10E8 拷贝/μL) | 50μL（红盖） |
| 试剂五 | DNA病毒裂解液（试用装） | 15次（9 mL） |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千 万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病 原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 段作为阳 性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分 震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照）， 一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL PCR 阳性对照的 10000 倍稀释 的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原 液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 100 倍稀释液。再取 10μL 此 稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加 上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取 决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 DNA。
9. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼 容。
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
10. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上 步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如果做定性 分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用 第 4 号阳性对照稀释液，浓度为 14810 拷贝/μL）。下面只描述定量分析的步骤， 定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕 后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后后加）：
成分 | 样品管 N+2个 | PCR阴性对照管 | PCR阳性 对照管（2-7管） |
2×qPCR MagicMix （棕色管） | 10 μL | 10 μL | 各10 μL |
绵羊疱疹病毒通用PCR 引物混合液（白盖） | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
自备10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
N+2待测样品DNA模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
第7步所得PCR阳性对照 稀释液（2-7号） | 不加 | 不加 | 各6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
12.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR（具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化）。
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 92℃ | 5分钟 |
PCR反应 （30个循环） | 92℃ | 60 秒 |
56℃ | 60 秒 | |
72℃ | 60 秒 |
13.数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时，大吸收光谱在471 nm，结合DNA时的大吸收光谱在500 nm，大发射光谱在530 nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。
四、数据处理
14.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
15.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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