小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。
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品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0558 |
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规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒
Peste Des Petits Ruminants Virus(PPRV)
产品及特点
小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽 疫病毒( Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV) 引起的急性、烈性传染病。它是世界 动物卫生组织(OIE)法定的 A 类传染病,我国将其定为Ⅰ类动物疫病。本产品就是专门用于小 反刍兽疫病毒的快速荧光 RT-PCR 检测的试剂盒,在动物或者动物产品的检测领域有广泛用 途,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 双酶一管式 RT-PCR,操作简单快捷。本试剂盒足够 25 次 30uL 体系的 RT-PCR 反应。
3. 提供阳性对照,便于在遇到问题时分析原因。
4. 引物经过优化,特异性高,引物是根据 PPR 病毒保守的 N 基因设计,产物长度为 1416 bp。
小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成 份 | 规格 |
试剂一 | 双酶一管式 RT-PCR Buffer,2× | 375 uL |
试剂二 | MMLV-Taq Mix | 50 uL |
试剂三 | RNase-free 水 | 1 mL |
试剂四 | PPRV 专一性引物一 | 50 uL |
试剂五 | PPRV 专一性引物二 | 50 μL |
试剂六 | PPRV 阳性对照 | 50 μL |
试剂七 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 6 个月。
自备试剂 样品 RNA。
使用方法 注意:所有离心管用前全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个 30uL 体系的 RT-PCR 为例,如果体积不同,各成分用量需要适当调节。
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout 或柱 式病毒 RNAout。
二:RT-PCR 2、在一干净的无 RNase 的 PCR 管中,按下表配制 RT-PCR 反应体系(30 uL 体系):
成分 | 样品 | 阳性对照 | 阴性对照 |
RNA 模板(自备) | 1-10 uL |
|
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PPRV 阳性对照 |
| 2μL |
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PPRV 专一性引物一 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
PPRV 专一性引物二 | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
RNase-free 水 | 补水到 13 uL | ||
双酶一管式 RT-PCR Buffer | 15 uL | 15 uL | 15 uL |
MMLV-Taq Mix | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
3、轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR,反应参数是:
过程 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 42℃ | 60 min |
预变性 | 94℃ | 5 min |
PCR 反应 (35 个循环) | 94℃ | 1 min |
55℃ | 1 min | |
72℃ | 2 min | |
延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
4、取 10-20 uL PCR 产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳,正确的扩增产物的大小为 1416 bp。阳性对照必须出现 1416bp 的 PCR 产物,否则 PCR 体系有问题,需要寻找原因。 如果阴性对照出现 1416bp 的 PCR 产物,则说明试剂或环境中有过去 PCR 产物的污染, 需要把样品制备和 RT-PCR 隔离进行。
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