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小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒

型    号:50次
所属分类:PCR-染料法
报    价: 市场价:
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小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒产品概述:

小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒

Peste Des Petits Ruminants Virus(PPRV)

产品及特点

小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽 疫病毒( Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV) 引起的急性、烈性传染病。它是世界 动物卫生组织(OIE)法定的 A 类传染病,我国将其定为Ⅰ类动物疫病。本产品就是专门用于小 反刍兽疫病毒的快速荧光 RT-PCR 检测的试剂盒,在动物或者动物产品的检测领域有广泛用 途,它具有下列特点: 

1. 即开即用,用户只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 双酶一管式 RT-PCR,操作简单快捷。本试剂盒足够 25 次 30uL 体系的 RT-PCR 反应。

3. 提供阳性对照,便于在遇到问题时分析原因。

4. 引物经过优化,特异性高,引物是根据 PPR 病毒保守的 N 基因设计,产物长度为 1416 bp。 

小反刍兽疫病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

成  份

规格

试剂一

双酶一管式 RT-PCR Buffer,2×

375 uL 

试剂二

MMLV-Taq Mix

50 uL

试剂三

RNase-free 水

1 mL

试剂四

PPRV 专一性引物一

50 uL

试剂五

PPRV 专一性引物二

50 μL

试剂六 PPRV 阳性对照  50 μL
试剂七

使用手册 

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 6 个月。 

自备试剂 样品 RNA。 

使用方法 注意:所有离心管用前全部短暂离心几秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一个 30uL 体系的 RT-PCR 为例,如果体积不同,各成分用量需要适当调节。

一、样品 RNA 的制备

1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司生产的一管式病毒 RNAout 或柱 式病毒 RNAout。

二:RT-PCR 2、在一干净的无 RNase 的 PCR 管中,按下表配制 RT-PCR 反应体系(30 uL 体系):

成分

样品

阳性对照

阴性对照

RNA 模板(自备) 

1-10 uL

 

 

PPRV 阳性对照 

 

2μL

 

PPRV 专一性引物一

2 uL

 2 uL

 2 uL

PPRV 专一性引物二 

 2 uL

2 uL

 2 uL

RNase-free 水 

补水到 13 uL 

双酶一管式 RT-PCR Buffer 15 uL  15 uL  15 uL 
 MMLV-Taq Mix 2 uL   2 uL  2 uL 

3、轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR,反应参数是: 

过程

温度

时间

逆转录 

42℃

60 min

预变性

94℃   

5 min

PCR 反应 (35 个循环)

94℃  

1 min 

55℃ 

1 min 

72

2 min

 延伸  72 10 min 

三、电泳检测

4、取 10-20 uL PCR 产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳,正确的扩增产物的大小为 1416 bp。阳性对照必须出现 1416bp 的 PCR 产物,否则 PCR 体系有问题,需要寻找原因。 如果阴性对照出现 1416bp 的 PCR 产物,则说明试剂或环境中有过去 PCR 产物的污染, 需要把样品制备和 RT-PCR 隔离进行。 

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