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猪圆环病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒

型    号:50次
所属分类:PCR-染料法
报    价: 市场价:2290
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猪圆环病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

猪圆环病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒产品概述:

猪圆环病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒

Porcine Circovirus 2 (PCV-2)

产品及特点

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)在分类学上属圆环病毒科圆环病毒属, 为已知的小的动物病毒之一。病毒粒子直径 14-17nm,呈 20 面体对称结构,无 囊膜,含有共价闭合的单股环状负链 DNA,基因组大小约为 1.76kb。PCV 对外界理 化因子的抵抗力很强。PCV-2 为致病性的病毒。猪对 PCV-2 具有较强的易感性,感 染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒,经口腔、呼吸道途径感染不同年龄的猪。因 此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本公司产品开发猪圆环病毒 2 型染料法荧光 定量 PCR 试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物根据猪圆环病毒 2 型专一区设计,特异性高。

3. 荧光定量 PCR 检测,比常规 PCR 更加灵敏。

4. 一管式闭管操作,降低了交叉污染。

5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。

6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。

猪圆环病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

猪圆环病毒 2 型染料法 qPCR 引物混 合液

100 μL(白盖)

试剂四

猪圆环病毒 2 型染料法 qPCR 阳性对 照(1×10E8 拷贝/μL)

50μL(红盖)

试剂五 天净沙核酸释放剂试用装 20 次(1mL,绿盖))

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

自备试剂   样品 DNA。

使用方法 一、制备标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。 由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,用带芯枪头, 下同)。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(其浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提 供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备 阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9. 如果进行定量分析,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照,6 个用于标准曲线样品。如果做定 性分析,则 6 个标准曲线样品只选一个做(可以选 4 号,其余样品不变)。 以下只介绍定量分析的反应设置。

10. 在标记管中按下表加入各成分:

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

标准曲线 样品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各 10 μL

猪圆环病毒 2 型染料法 qPCR 引物 混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2 个待测样品 DNA 模板 

6 μL

 

 

第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液(2-7 号)

 

 

各 6μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…)

11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同 而自行优化)。

四、荧光定量 PCR 反应参数

过程

温度

时间

预变性

95℃

5 min

 

PCR 反应

(40 个循环

95℃

15 sec

60℃

1 min(采集 SYBR 通道的荧 光信号)

五、数据处理

12. 设定 60℃-96℃范围的熔解曲线分析,排除假阳性。

13. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

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