猪圆环病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒

猪圆环病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒

Porcine Circovirus 2 (PCV-2)

产品及特点

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）在分类学上属圆环病毒科圆环病毒属， 为已知的小的动物病毒之一。病毒粒子直径 14－17nm，呈 20 面体对称结构，无 囊膜，含有共价闭合的单股环状负链 DNA，基因组大小约为 1.76kb。PCV 对外界理 化因子的抵抗力很强。PCV-2 为致病性的病毒。猪对 PCV-2 具有较强的易感性，感 染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒，经口腔、呼吸道途径感染不同年龄的猪。因 此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本公司产品开发猪圆环病毒 2 型染料法荧光 定量 PCR 试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物根据猪圆环病毒 2 型专一区设计，特异性高。

3. 荧光定量 PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。

4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。

5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。

6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

猪圆环病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。

自备试剂   样品 DNA。

使用方法 一、制备标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。 由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原， 本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的 DNA 段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，用带芯枪头， 下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（其浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提 供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备 阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9. 如果进行定量分析，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线样品。如果做定 性分析，则 6 个标准曲线样品只选一个做（可以选 4 号，其余样品不变）。 以下只介绍定量分析的反应设置。

10. 在标记管中按下表加入各成分：

11. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同 而自行优化）。

四、荧光定量 PCR 反应参数

五、数据处理

12. 设定 60℃-96℃范围的熔解曲线分析，排除假阳性。

13. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。