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牙龈卟啉单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒

牙龈卟啉单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-08-11
  • 访  问  量:397
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0600
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

牙龈卟啉单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒

Porphyromonas gingivalis

产品及特点

牙龈卟啉单胞菌是一种非酵解糖的革兰氏阴性厌氧球杆菌,是研究广泛且证 据充足的重要牙周致病菌之一。口腔含有牙龈卟啉单胞菌是引发牙周病的一种主 要细菌。牙龈卟啉单胞菌不仅可以引起发炎,它还能导致现在常见的抗生素抗性。 荧光定量 PCR 是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测牙龈卟啉单胞菌的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2. 特异性高,引物是根据牙龈卟啉单胞菌高度保守区设计,不会扩增其他细菌。

3. 引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。

4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。

5. 一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。

6. 本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。

牙龈卟啉单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

牙龈卟啉单胞菌染料法 qPCR 引物混合液

100 μL(白盖)

试剂四

牙龈卟啉单胞菌染料法 qPCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL)

50μL(红盖)

试剂五 

天净沙核酸释放剂(试用装)

 

20 次(1mL,绿盖)

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

自备试剂   DNA模板、10×ROX(根据机型决定具体见使用方法

使用方法一、制备标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。 由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。 2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,用带芯枪头, 下同)。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(其浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提 供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备 阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。 

三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9. 如果进行定量分析,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照,6 个用于标准曲线样品。如果做定 性分析,则 6 个标准曲线样品只选一个做(可以选 4 号,其余样品不变)。 以下只介绍定量分析的反应设置。

10. 在标记管中按下表加入各成分:

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

PCR阳性

对照管(2-7管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各10 μL

牙龈卟啉单胞菌染料法 qPCR 引 物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各2 μL

 N+2待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

自备超纯水 6μL 

第7步所得PCR阳性对照

稀释液(2-7

不加

不加

6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同 而自行优化)。

过程

温度

时间

 预热50℃ 2 min

预变性

95℃

10 min

PCR 反应 (40 个循环)

95℃

15 sec

60℃

1 min(采集 SYBR 通道的荧 光信号)

五、数据处理

12. 设定 60℃-96℃范围的熔解曲线分析,排除假阳性。

13. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

14. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该 小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小 于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性,如果小于 40,则为阳性。

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