狂犬病病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒，根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在，主要侵犯外胚层发育而成的组织，例如：皮肤、粘膜和神经组织。
产品型号：50次厂商性质：生产厂家更新时间：2020-08-11访 问 量：321
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| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0621 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
| 主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
狂犬病病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
Rabies Virus
产品及特点
狂犬病病毒（Rabies Virus, RV）属于弹状病毒科狂犬病毒属，为 RNA 病毒，它 是引起狂犬病的病原体。狂犬病毒会引发狂犬病，属于人畜共患的传染病，由于该病毒 能对人体健康造成严重损害，因此快速检测狂犬病病毒具有重要意义。本试剂盒根据 RT-PCR 原理开发，具有下列特点：
1. 使用本公司开发的一管式荧光定量 RT-PCR试剂盒，灵敏度比常规 RT-PCR高2-3 个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
2. 封闭式，避免扩张产物对后续实验的污染。
3. 根据狂犬病病毒的保守序列设计的专一性 RT-PCR 引物，与相关病毒无交叉反应。
4. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 RT-PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
狂犬病病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒规格及成分
| 编号 | 成 份 | 规格 |
| 试剂一 | 2×qRT-PCR 缓冲液 | 500 μL（棕色管） |
| 试剂二 | 10×qRT-PCR酶混合液 | 100 μL（红盖） |
| 试剂三 | ROX染料I，50× | 20 μL（棕色管） |
| 试剂四 | ROX染料II，50× | 20 μL（棕色管） |
| 试剂五 | 荧光PCR模板稀释液 | 1mL（亮黄盖） |
| 试剂六 | 狂犬病病毒RT-PCR引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂七 | 狂犬病病毒RT-PCR阳性对照 （1×10E8拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂八 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20次（1mL，绿盖） |
| 试剂九 | 使用手册 | 1份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存(阳性对照分开放置)，有效期一年。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、 稀释阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。
1. 注意：本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的核酸片段作为阳 性对照。下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的 其他成分。
2. 标记 6 个 RNase-free 离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯 RNase-free 枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震 荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备 8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照）， 一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的阳性对照梯度稀释液 中的第 4 号（浓度为 1×10E4 copy/μL，10μL 相当于 1 万拷贝）或第 5 号（浓 度为 1×10E5 copy/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水作为制备 的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要 求）。可以用水作为制备的阴性对照。
9. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试 剂盒兼容。
三、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个 样品，1 个用于 RT-PCR 阴性对照，6 个用于 RT-PCR 阳性对照）。如果做 2-3 次重复，则反应设置数量相应增加。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕 后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后后加）：
成分 | N+2个制备所得样品 | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性 对照（2-7管） |
2×qRT-PCR 缓冲液 | 10μL | 10μL | 各10μL |
狂犬病病毒 RT-PCR 引物混合物 | 2μL | 2μL | 各2μL |
50×ROX (见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各0.4μL |
样品制备所得RNA模板（来于第8步） | 5.6μL | 不加 | 不加 |
稀释所得6个阳性对照（来于第6步） | 不加 | 不加 | 各5.6μL（2号样到2号管，3号样到3号管…） |
10×qRT-PCR 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
12. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 RT-PCR（具体 RT-PCR 参数可以根据仪器不 同而自行优化）。
过程 | 温度 | 时间 |
RT（逆转录） | 50℃ | 15-30分钟 |
预变性 | 94℃ | 5 分钟 |
RT - PCR 反应 （40 个循环） | 94℃ | 20 秒 |
62℃ | 20 秒 （采集FAM通道的荧光信号） | |
72℃ | 15 秒 | |
按仪器预设程序进行溶解曲线分析 | ||
13. 如果 PCR 阳性对照和 PCR 阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，则说明 PCR 有 效，可以进行后续分析。以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制 标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值， 再推算出其浓度。
14. 如果 PCR 阳性对照或 PCR 阴性对照任何一个没有得到预期阳性和阴性结果（如 PCR 阳性对照没有扩增，或阴性对照出现扩增），则说明 PCR 实验无效或污染， 不需要进行后续分析，需要重复 PCR 或请跟厂家联系。
15. 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，说明样品 制备操作有效，实验结果有效。
16. 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照任何一个没有得到预期结果（如样品制 备阳性对照无扩增，或样品制备阴性对照有扩增），说明样品制备操作无效或有污 染，实验结果无效，需要重复样品制备过程或请跟厂家联系。
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