小孢子酒曲菌染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒，根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在，主要侵犯外胚层发育而成的组织，例如：皮肤、粘膜和神经组织。
产品型号：50次厂商性质：生产厂家更新时间：2020-08-11访 问 量：387
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| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0632 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
| 主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
小孢子酒曲菌染料法荧光定量PCR试剂盒
Rhizopus microspous
产品及特点
较之细菌来讲, 酒曲菌属具有许多优势, 包括淀粉分解特性、较低的营养需求量、 以及富含价值的发酵副产物。酒曲菌发酵能制得乳酸。因此小孢子酒曲菌的快速准确 鉴定有着重要作用。本公司产品开发小孢子酒曲菌染料法荧光定量 PCR 试剂盒，它具 有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物根据小孢子酒曲菌专一区设计，特异性高。
3. 荧光定量 PCR 检测，比常规 PCR 更加灵敏。
4. 一管式闭管操作，降低了交叉污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
小孢子酒曲菌染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 2×PCR MagicMix | 500μL（棕色） |
试剂二 | 荧光 PCR 模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
试剂三 | 小孢子酒曲染料法 qPCR 引物混 合液 | 100 μL（白盖） |
试剂四 | 小孢子酒曲染料法 qPCR 阳性对 照(1×10E8 拷贝/μL) | 50μL（红盖） |
| 试剂五 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20 次（1mL，绿盖）） |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于阳性对照浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千 万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病 原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 段作为阳 性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)， 充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分 震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备 8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照）， 一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL PCR 阳性对照的 10000 倍稀释 的（稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝，可以将 10μL 原 液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 100 倍稀释液。再取 10μL 此 稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中，充分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加 上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取 决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 DNA。
9. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒 兼容。
三、设置 qPCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）
10. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上 步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如果做定性 分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于 PCR 阳性对照（用 第 4 号阳性对照稀释液，浓度为 14810 拷贝/μL）。下面只描述定量分析的步骤， 定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕 后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后后加）：
成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | 标准曲线 样品管（2-7 管） |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
小孢子酒曲菌染料法 qPCR 引物 混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2 个待测样品 DNA 模板 | 6 μL |
|
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| 自备超纯水 | 6 μL | ||
第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液（2-7 号） |
|
| 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
12. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 优化）。
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （40 个循环） | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min（采集 SYBR 通道的荧 光信号） |
四、数据处理
13. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵 轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 cDNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
14. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等 于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为 阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则 为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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