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血吸虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

血吸虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-08-12
  • 访  问  量:295
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0656
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

血吸虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

Schistosoma spp.

产品及特点

血吸虫通用(Schistosoma spp.) 会引起血吸虫病,该病主要通过皮肤,黏膜与疫水接触受染。患病后,侵袭期患者可有咳嗽、胸痛、偶见痰中带血丝等症状,急性期临床上常会出现发热痢疾样大便带血和黏液肝脾大咳嗽胸痛,血痰等症状慢性期多因急性期未曾发现,未治疗或治疗不*,或多次少量重复感染等原因,逐渐发展而成,晚期病人极度消瘦,出现腹水、巨脾,腹壁静脉怒张等晚期严重症状。感染该病对人体健康造成严重损害,因此快速检测血吸虫通用具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测血吸虫通用的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2.特异性高,引物是根据人血吸虫通用高度保守区设计,不会扩增其他细菌和微生物

3. 引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。

4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。

5. 一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。

6. 本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。

血吸虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

血吸虫通用PCR引物

100 μL(白盖)

试剂四

血吸虫通用阳性对照

(1×10E8拷贝/μL)

50μL(红盖)

试剂五 天净沙核酸释放剂试用装 20 次(1mL,绿盖))

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

自备试剂   样品 DNA。

使用方法 一、制备标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
3.在7号管中加入5 μL 阳性对照(其浓度为1×10E8拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.用自选方法纯化样品的DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有N个样品,则需要进行N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的天净沙DNA释放剂试用装。则按下面步骤操作:
9.配制溶液A工作液。以配制1mL工作液(足够10个样品)为例:在一干净塑料管中加入10μL溶液A成分一,20μL溶液A成分二和970μL超纯水,充分混合均匀即可。溶液A工作液可室温放置,但在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要100μL溶液A工作液,1mL工作液足够10个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液A工作液的体积需要做相应的调整。
10.在标记好的N+2个离心管中,加入1-5mg(半粒芝麻大小)固体待测样品或5μL液体待测样品。在样品制备阳性对照中加入5μL阳性对照,在样品制备阴性对照中加入5μL水。
11.在每个管中加入100 μL溶液A工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。
12.95℃保温10分钟。
13.待冷却到常温后加入10μL溶液B并混匀得DNA释放液。每个样品得到的DNA释放液足够进行50-100次PCR。
三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
14.如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
15.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后后加):

成分

样品管

N+2

PCR阴性对照管

标准曲线

样品管(2-7管)

2×qPCR MagicMix

(棕色

10 μL

10 μL

各10 μL

血吸虫通用 PCR引物混合液(白

2 μL

2 μL

2 μL

自备10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各2 μL

 待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

第7步所得标准曲线样品稀释液(2-7

不加

不加

6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

16.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。

四、荧光定量PCR反应参数

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

PCR反应

(35个循环)

94

0.5 min

50℃

0.5 min(采集SYBR通道的荧光信号

72℃

0.5 min

后延伸

72

  • min

五、数据处理
17.设定60℃-96℃范围的融解曲线分析,排除假阳性。
18.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
19.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。
五、电泳检测
如果有必要电泳确认,可取10-20 μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400 bp。

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