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溶藻弧菌染料法荧光定量PCR试剂盒

溶藻弧菌染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-08-14
  • 访  问  量:400
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0740
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

溶藻弧菌染料法荧光定量PCR试剂盒

Vibrio alginolyticus

产品及特点

巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)是一种疱疹病毒组 DNA 病毒。亦称细
胞包涵体病毒,由于感染的细胞肿大,并具有巨大的核内包涵体。巨细胞病毒分布广泛,其他动物皆可遭受感染,引起以生殖泌尿系统,中枢神经系统和肝脏疾患为主的各系统感染,从轻微无症状感染直到严重缺陷或死亡。对于孕妇或有慢性消耗性疾病、免疫力低下等患者要注意保护。本公司开发巨细胞病毒染料法荧光定量PCR试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2. 特异性高,引物是根据鹦鹉热衣原体高度保守区设计,不会扩增其他微生物。

3. 引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。

4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。

5. 一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。

6. 本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。

溶藻弧菌染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

巨细胞病毒染料法qPCR引物混合液

100 μL(白盖)

试剂四

巨细胞病毒染料法qPCR阳性对照(1×10E8拷贝/μL)

50μL(红盖)

试剂五 天净沙核酸释放剂试用装 20 次(1mL,绿盖))

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

自备试剂   样品 DNA。

使用方法 一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1.注意:由于阳性对照浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA段作为阳性对照。
2.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7.重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8.如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL PCR阳性对照的10000倍稀释的(稀释后浓度为1×10E4拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝,可以将10μL原液加入到990μL 自备TE溶液中,充分混匀,此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL 自备TE溶液中,充分混匀,此为10000倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品DNA。
9.用自选方法纯化N+2个样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液,浓度为14810拷贝/μL)。下面只描述定量分析的步骤,定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个,其余不变。
11.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后后加):

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

标准曲线 样品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各 10 μL

巨细胞病毒染料法 qPCR 引物 混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2 个待测样品 DNA 模板 

6 μL

 

 

自备超纯水  6 μL 

第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液(2-7 号)

 

 

各 6μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…)

12.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。

过程

温度

时间

预变性

95

5 min

PCR反应

(40个循环)

95℃

15 sec

60

1 min,(采集SYBR通道的荧光信号

仪器预设程序进行曲线分析

四、数据处理
13.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品cDNA浓度的log值,再推算出其浓度。
14如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于36。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于36则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-36之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于36则为阴性,如果小于35,则为阳性

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