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弧菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

弧菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-08-14
  • 访  问  量:348
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0744
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

弧菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

Vibrio spp.

产品及特点

弧菌(Vibrio spp.)是菌体短小,弯曲成弧形,尾部带一鞭毛的革兰氏阴性菌。弧菌属广泛分布于河口、海湾、近岸海域的海水和海洋动物体内。该菌引起的食物中毒经烹饪不当的海产品或盐腌制品所传播。常见的为海蛰、海鱼、海虾及各种贝类,因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后,也可发生食物中毒。该菌常年均可发生,可从自限性腹泻至中度霍乱样病症,有腹痛、腹泻、呕吐和低热,粪便多为水样,少数为血水样,恢复较快,病后免疫力不强,可重复感染,该菌还可引起浅表创伤感染、败血症等,给人体健康带来严重损害,因此弧菌检测具有重要的意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测弧菌的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2.特异性高,引物是根据人弧菌高度保守区设计,不会扩增其他细菌

3. 引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。

4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。

5. 一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。

6. 本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。

弧菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

弧菌PCR引物混合液

100 μL(白盖)

试剂四

弧菌PCR阳性对照

(1×10E8拷贝/μL)

50μL(红盖)

试剂五 天净沙核酸释放剂试用装 20 次(1mL,绿盖))

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

自备试剂   样品 DNA。

使用方法 一、制备标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA段作为阳性对照。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
3.在7号管中加入5 μL 阳性对照(其浓度为1×10E8拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
7.用自选方法纯化样品的DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8.如果有N个样品,则需要进行N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
9.如果进行定量分析,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。
10.在标记管中按下表加入各成分:

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

标准曲线 样品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各 10 μL

弧菌 PCR引物混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2 个待测样品 DNA 模板 

6 μL

 

 

自备超纯水  6 μL 

第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液(2-7 号)

 

 

各 6μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
四、荧光定量PCR反应参数

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

PCR反应

(40个循环)

94

0.5 min

50℃

0.5 min(采集SYBR通道的荧光信号

72℃

0.5 min

后延伸

72

10 min

五、数据处理
12.设定60℃-96℃范围的融解曲线分析,排除假阳性。
13.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
14.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

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