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黄头病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

黄头病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-08-17
  • 访  问  量:371
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0761
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

黄头病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

Yellow Head Virus(YHV)

产品及特点

黄头病毒(Yellow Head Virus,YHV)是一种 RNA 病毒,黄头病是对虾的 主要病害之一,病毒感染的靶器官为虾的鳃、触角腺、造血组织、淋巴器官等。 病虾发病初期摄食量增加,然后突然停止吃食,在 2-4 天内会出现临床现象并死 亡。许多濒临死亡的虾聚集在池塘角落的水面附近,其头胸甲因里面的干胰腺发 黄而变成黄色,对虾体色发白,鳃棕色或白色,濒临死亡的虾其外胚层和中胚层 发源的器官会出现全身性的坏死,已纳入世界卫生组织规定之检疫传染病之一, 因此黄头病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于 PCR 原理开发。它具有下列特点:

1.一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2.根据黄头病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3.基于染料法qRT-PCR检测,灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍,可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术,RT和PCR两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于临床。

黄头病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

成  份

规格

试剂一

2×qRT-PCR 缓冲液

500 μL(棕色管)

试剂二

10×qRT-PCR酶混合液

100 μL(红盖)

试剂三

 ROX染料I,50×

20 μL(棕色管)

试剂四

ROX染料II,50×

20 μL(棕色管)

试剂五

荧光PCR模板稀释液

1mL(亮黄盖)

试剂六

西尼罗病毒RT-PCR引物混合液

100 μL(白盖)

试剂七

西尼罗病毒RT-PCR阳性对照

(1×10E8拷贝/μL

50 μL(黄盖)

试剂八

天净沙核酸释放剂试用装

20次(1mL,绿盖)

试剂九

使用手册

1份

运输及保存 低温运输、-20℃保存(阳性对照分开放置),有效期一年。 

自备试剂   样品 DNA。

使用方法 一、稀释阳性对照(以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。用带芯枪头分别加入45 μL 荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
2.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(本试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
3.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
4.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
5.如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×10E4拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
6.用自选方法纯化N+2个样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。
三、设置RT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
7.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液做模板)。下面只描述定量分析的步骤,定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个,其余不变。
8.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后后加):

成分

N+2制备所得样品

RT-PCR阴性对照

RT-PCR阳性

对照(2-7管)

2×qRT-PCR 缓冲液

10μL

10μL

各10μL

 

黄头病毒染料法RT-PCR 引物混合液

2μL

2μL

2μL

50×ROX (见注)

0.4μL

0.4μL

各0.4μL

 样品制备所得RNA模板(来于8

5.6μL

不加

不加

稀释所得6个阳性对照(来于第6步)

不加

不加

5.6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

10×qRT-PCR

酶混合液

2μL

2μL

2μL

9.上机后按下面参数进行RT-PCR(参数可能会因仪器不同而需优化)。

过程

温度

时间

RT逆转录

50℃

2 min

预变性

95℃

10 min

RT - PCR反应

30个循环)

95℃

15 sec

60

1 min(采集 SYBR 通道的荧光信号)

仪器预设程序进行溶解曲线分析

四、数据处理

10. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于 或等于 37。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于 或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 37 则为阴性,如果小于或等 于 30 则为阳性。如果在 30-37 之间,则重复一次。

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