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DNA去磷酸化试剂盒分子克隆时,载体的自连极大降低了连接效率,而对载体DNA两个5′端的-PO4基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。
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DNA去磷酸化试剂盒产品及特点
分子克隆时,载体的自连极大降低了连接效率,而对载体DNA两个5′端的-PO4
基团进行去磷酸化处理可以抑制自连反应。此外在进行DNA或RNA5′端标记前,也
需要将其本来的-PO4基团去除再加上标记基团。本公司开发的DNA去磷酸化产品就
是针对这一目的而开发。其反应示意图如下:
DNA去磷酸化试剂盒它具有下列特点:
1. 基于细菌碱性磷酸酶,反应在较高温度进行,效率更高。
2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基团变成-OH基团,丧失连接能力。
3. 模板可以是单链,也可以是双链,既可以是DNA,也可以是RNA。
4. 处理后的核酸纯化后可以直接用于连接反应和标记反应。
5. 本产品足够20次去磷酸化实验。
使用及效果
在离心管中加入不超过10 pmolDNA片段、10×去磷酸缓冲液、细菌碱性磷酸酶
超纯水,65℃反应30分钟。酚抽提去除酶活性,乙醇沉淀DNA待用。120896-200 大鼠中性粒细胞分离液 1.091 200mL 600 8-17
120897-200 大鼠粒细胞分离液 1.119 200mL 600 8-17
120898-200 人肿瘤细胞分离液 1.055 200mL 600 8-17
120899-200 人胰岛细胞分离液 1.056 200mL 600 8-17
120901-200 人内皮细胞分离液 1.060 200mL 600 8-17
120902-200 人 NK 细胞分离液 1.062 200mL 600 8-17
120903-200 人单核细胞分离液 1.075 200mL 210 8-17
120904-200 人淋巴细胞分离液 1.077 200mL 600 8-17
120905-200 人淋巴细胞分离液 1.077(FICOLL 配置 ) 200mL 600 8-17
120906-200 人白细胞分离液 1.078 200mL 600 8-17
120907-200 人中性粒细胞分离液 1.085 200mL 600 8-17
120908-200 人粒细胞分离液 1.113 200mL 600 8-17
120909-200 小鼠肿瘤细胞分离液 1.070 200mL 600 8-17
120910-200 小鼠内皮细胞分离液 1.071 200mL 600 8-17
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