伴放线放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒，根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在，主要侵犯外胚层发育而成的组织，例如：皮肤、粘膜和神经组织。
产品型号：50次厂商性质：生产厂家更新时间：2020-07-20访 问 量：333
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| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0021 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
| 主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 放这段不 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
伴放线放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
Actinobacillus actinomycetemcomitans
产品及特点
伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)是一种革兰阴性的球杆菌，该细菌可以引起一些严重的全身感染，越来越多的研究发现该细菌还可能引起其他疾病,如心内膜炎、心包炎、肺炎、菌血症、败血症、骨髓炎、皮肤感染、尿路感染及各种脓肿等，此外，它还能产生如白细胞毒素、脂多糖、趋化抑制因子等多种毒力因子,这些毒力因子有利于细菌在宿主体内定植、破坏组织、抑制组织修复、干扰宿主免疫反应等，因此快速检测伴放线放线杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术，本产品就是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测伴放线放线杆菌的试剂盒，它具有下列特点：
1.开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 特异性高，引物是根据人伴放线放线杆菌高度保守区设计,不会扩增其他细菌
3.引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规PCR高100倍。
4.提供无传染性的PCR阳性对照，便于区分假阴性样品。
5.一管式操作，荧光PCR检测，不容易产生环境污染。
6. 本产品只能用于科研，本试剂盒足够50次20μL体系的PCR。
伴放线放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 2×PCR MagicMix | 0.5 mL（棕色） |
试剂二 | 荧光 PCR 模板稀释液 | 1 mL（黄盖） |
试剂三 | 伴放线放线杆菌 PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
试剂四 | 伴放线放线杆菌 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL（红盖） |
试剂五 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20次（1mL，绿盖） |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输、-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 样品DNA。
使用方法 一、制备标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA段作为阳性对照。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
3.在7号管中加入5 μL 阳性对照（其浓度为1×10E8拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7.用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的天净沙核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤
9.如果进行定量分析，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做定性分析，则6个标准曲线样品只选一个做（可以选4号，其余样品不变）。以下只介绍定量分析的反应设置。
10.在标记管中按下表加入各成分：
成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | 标准曲线 样品管（2-7 管） |
2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
伴放线放线杆菌 PCR引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
自备 10×ROX (见注) | 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
N+2个待测样品DNA模板 | 6 μL | 不加 | 不加 |
| 自备超纯水 | 不加 | 6 μL | 不加 |
第 7 步所得标准曲线样 品稀释液（2-7 号） | 不加 | 不加 | 各 6μL（2 号样到 2 号管，3 号样到 3 号管…） |
11.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR（具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化）。
四、荧光定量PCR反应参数
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 94℃ | 5 min |
PCR 反应 （40个循环） | 94℃ | 0.5 min |
50℃ | 0.5 min（采集 SYBR 通道的 荧光信号） | |
72℃ | 0.5 min | |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
四、数据处理
12.设定60℃-96℃范围的融解曲线分析，排除假阳性。
13. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度
14. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等 于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为 阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则 为阴性，如果小于 40，则为阳性。
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