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伴放线放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

伴放线放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-20
  • 访  问  量:316
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0021
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 放这段不应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

伴放线放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

Actinobacillus actinomycetemcomitans

产品及特点

伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)是一种革兰阴性的球杆菌,该细菌可以引起一些严重的全身感染越来越多的研究发现该细菌还可能引起其他疾病,如心内膜炎、心包炎、肺炎、菌血症、败血症、骨髓炎、皮肤感染、尿路感染及各种脓肿等,此外,它还能产生如白细胞毒素、脂多糖、趋化抑制因子等多种毒力因子,这些毒力因子有利于细菌在宿主体内定植、破坏组织、抑制组织修复、干扰宿主免疫反应等因此快速检测伴放线放线杆菌具有重要意义。荧光定量PCR是检测传染性疾病的主流技术,本产品就是以染料荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测伴放线放线杆菌的试剂盒,它具有下列特点:

1.开即用,用户只需要提供DNA模板

2. 特异性高,引物是根据人伴放线放线杆菌高度保守区设计,不会扩增其他细菌

3.引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规PCR高100倍

4.提供无传染性的PCR阳性对照,便于区分假阴性样品。

5.一管式操作,荧光PCR检测,不容易产生环境污染

6. 产品只能用于科研,试剂盒足够50次20μL体系的PCR。

伴放线放线杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

0.5 mL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

伴放线放线杆菌 PCR 引物混合液

100 μL(白盖)

试剂四

伴放线放线杆菌 PCR 阳性对照

(1×10E8 拷贝/μL)

50 μL(红盖)

试剂五

天净沙核酸释放剂试用装

20次(1mL,绿盖)

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输、-20℃保存,有效期一年。

自备试剂 样品DNA

使用方法 一、制备标准曲线样品(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA段作为阳性对照。

1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。

2.用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)

3.7号管中加入5 μL 阳性对照(其浓度为10E8拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡1分钟,得10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

4.换枪头,在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

5.换枪头,在5号管中加入5 μL 10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。

6.重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

 二、样品 DNA 的制备

7.用自选方法纯化样品的DNA,本产品市场绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有N个样品,则需要进行N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的天净沙核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板,省略了DNA提取步骤

9.如果进行定量分析,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。

10.标记管中下表加入各成分:

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

标准曲线 样品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix 

10 μL

10 μL

各 10 μL

伴放线放线杆菌 PCR引物混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2个待测样品DNA模板

6 μL

不加

不加

 自备超纯水

 不加

 6 μL

 不加

第 7 步所得标准曲线样 品稀释液(2-7 号)

不加

不加

各 6μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…)

11.盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。

 四、荧光定量PCR反应参数

过程

温度

时间

预变性

94

5 min

 

PCR 反应

40个循环

94

0.5 min

50℃

0.5 min(采集 SYBR 通道的 荧光信号)

72℃

0.5 min

延伸

72℃

10 min

四、数据处理

12.设定60-96范围的融解曲线分析,排除假阳性。

13. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,推算出其浓度

14. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大于或等 于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性,如果小于或等于 35 则为 阳性。如果在 35-40 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则 为阴性,如果小于 40,则为阳性。 

     

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