牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。
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品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0040 |
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规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒
Akabane Disease Virus(AKAV)
产品及特点
牛赤羽病毒(Akabane Virus,AKAV) 会引起赤羽病,又称阿卡班病,是牛、 羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水 性无脑综合症为特征的病毒性传染病。特征性的表现是妊娠牛异常分娩,多发生 于怀孕 7 个月以上或接近妊娠期满的牛。感染初期胎龄越大的胎儿早产发生的越 多,中期发生难产,即使顺产,新生犊也不能站立。后期多产出无生活能力的犊 牛或瞎眼的犊牛。该病毒会给养殖业带来较大的经济损失,因此灵敏快捷的诊断 产品具有重要的意义。为此本公司开发了本产品,可用于在科研领域快速定量检 测牛赤羽病病毒。它具有下列特点:
1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据牛赤羽病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200 μL(黄盖) |
试剂二 | MMLV-Taq Mix | 75 μL(红盖) |
试剂三 | 超纯水 | 1 mL(蓝盖) |
试剂四 | 牛赤羽病病毒 RT-PCR 引物混合液 | 100 μL(白盖) |
试剂五 | 牛赤羽病病毒 RT-PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 50 μL(黄盖) |
试剂六 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20 次(1mL,绿盖) |
试剂七 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 牛赤羽病毒 PCR 阳 性对照的 10000 倍稀释的(稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL,10μL 相当于 1 万拷贝,可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中,充分混匀,此 为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中,充分 混匀,此为 10000 倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水 后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水 作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装,
二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)
3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 | 样品管 N+2 个 | PCR 阴性 对照管 | 标准曲线 样品管(2-7 管) |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 各4 μL | 4 μL | 4 μL |
牛赤羽病毒 RT-PCR 引物混合液 | 各2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 个制备的 RNA 样品 | 12.5 μL | 不加 | 不加 |
超纯水 | 不加 | 12.5 μL | 不加 |
牛赤羽病病毒 RT-PCR 阳性对照 的 10000 倍稀释液 | 不加 | 不加 | 12.5 μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
过程 | 温度 | 时间 |
逆转录 | 42℃ | 60 分钟 |
预变性 | 95℃ | 5 分钟 |
PCR 反应 (35个循环) | 95℃ | 30 秒 |
58℃ | 30 秒 | |
72℃ | 30 秒 | |
延伸 | 72℃ | 10 分钟 |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果,阳性样品预期得到的扩增产物长度为 720bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物,则说明实验失败,需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有此扩增产物则为阳性, 如果无则为阴性。
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