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牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒

牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-21
  • 访  问  量:404
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0040
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒

Akabane Disease Virus(AKAV)

产品及特点

牛赤羽病毒(Akabane Virus,AKAV) 会引起赤羽病,又称阿卡班病,是牛、 羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水 性无脑综合症为特征的病毒性传染病。特征性的表现是妊娠牛异常分娩,多发生 于怀孕 7 个月以上或接近妊娠期满的牛。感染初期胎龄越大的胎儿早产发生的越 多,中期发生难产,即使顺产,新生犊也不能站立。后期多产出无生活能力的犊 牛或瞎眼的犊牛。该病毒会给养殖业带来较大的经济损失,因此灵敏快捷的诊断 产品具有重要的意义。为此本公司开发了本产品,可用于在科研领域快速定量检 测牛赤羽病病毒。它具有下列特点: 

1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2. 根据牛赤羽病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。

牛赤羽病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(黄盖)  

试剂二

 MMLV-Taq Mix

75 μL(红盖) 

试剂三

超纯水

1 mL(蓝盖)

试剂四

牛赤羽病病毒 RT-PCR 引物混合液 

100 μL白盖) 

试剂五 牛赤羽病病毒 RT-PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL)   50 μL(黄盖)
试剂六 天净沙核酸释放剂试用装  20 次(1mL,绿盖) 

试剂七

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。 

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 牛赤羽病毒 PCR 阳 性对照的 10000 倍稀释的(稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL,10μL 相当于 1 万拷贝,可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中,充分混匀,此 为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中,充分 混匀,此为 10000 倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水 后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水 作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装,

二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)

3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分: 

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

标准曲线 样品管(2-7 管)

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

牛赤羽病毒 RT-PCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

 N+2 个制备的 RNA 样品12.5 μL  不加 不加

超纯水

 不加

 12.5 μL

 不加

 牛赤羽病病毒 RT-PCR 阳性对照 的 10000 倍稀释液  不加 不加  12.5 μL
MMLV-Taq Mix  1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:

过程

温度

时间

逆转录

42℃

60 分钟 

 预变性 95℃5 分钟

 

PCR 反应

35个循环

95℃ 

30 秒

 58℃30 秒

72℃ 

30 秒

 延伸 72℃ 10 分钟

 

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果,阳性样品预期得到的扩增产物长度为 720bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物,则说明实验失败,需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有此扩增产物则为阳性, 如果无则为阴性。 

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