非洲马瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒，根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在，主要侵犯外胚层发育而成的组织，例如：皮肤、粘膜和神经组织。
产品型号：50次厂商性质：生产厂家更新时间：2020-07-21访 问 量：360
立即咨询
联系电话：15221858802
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0034 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
| 主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
非洲马瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
African Horse Sickness Virus(AHSV)
产品及特点
非洲马瘟病毒(African Horse Sickness Virus，AHSV)会引起非洲马瘟，是 一种马属动物的急性或亚急性传染病，该病以发热、皮下结缔组织与肺水肿以及 内脏出血为特征，只能通过昆虫传播。马对此病的易感性高，病死率高达 95%。 本病发生有明显的季节性和地域性，多见于温热潮湿季节，常呈地方流行或暴发 流行，传播迅速，因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本公司产品开发非 洲马瘟病毒染料法荧光定量 RT-PCR 试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据非洲马瘟病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 基于染料法 qRT-PCR 检测，灵敏度比常规 RT-PCR 高 10-100 倍，可以达 到至少 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 qRT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中 间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 30μL 体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。
非洲马瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | 2×qRT-PCR 缓冲液 | 500 μL（棕色管） |
试剂二 | 10×qRT-PCR 酶混合液 | 100 μL（红盖） |
试剂三 | ROX 染料 I，50× | 20 μL（棕色管） |
试剂四 | ROX 染料 II，50× | 20 μL（棕色管） |
| 试剂五 | 荧光 PCR 模板稀释液 | 1mL（黄盖） |
试剂六 | 非洲马瘟病毒染料法 qRT-PCR 引物混合液 | 100 μL（白盖） |
| 试剂七 | 非洲马瘟病毒染料法 qRT-PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） |
| 试剂八 | 天净沙核酸释放剂（试用装） | 20 次（1mL，绿盖） |
| 试剂九 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。阳性对照需要因易污染其他成分需 要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供 DNA 段作为阳性对照。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非 常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行）。为增加产品稳定性和避免扩 散传染性病原。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入 45 μL 荧 光 PCR 模板稀释液，用带芯枪头，下同）。
2. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照(本试剂盒提供)，充分 震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
3. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
4. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。重 复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 二、样品 RNA 的制备
5. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性 对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的阳性对照 梯度稀释液中的第 4 号（浓度为 1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于 1 万拷贝） 再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品 体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。
6. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次免 RNA 提取的天净沙核酸释放剂试 用装，
三、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
7. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用 于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照，6 个用于标准曲线。如 果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用 于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用 于 PCR 阳性对照（用第 4 号阳性对照稀释液做模板）。下面只描述定量分析 的步骤，定性分析只是把 6 个标曲反应缩减成 1 个，其余不变。
8. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设 置完毕后才设置阳性对照，阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后后加）：
成分 | N+2 个制备 所得样品 | qRT-PCR 阴性对照 | qRT-PCR 阳性 对照（2-7 管） |
2×qRT-PCR 缓冲液 | 10μL | 10μL | 各10μL |
非洲马瘟病毒染料法 qRT-PCR 引物混合物 | 2 μL | 2 μL | 各2 μL |
| 50×ROX (见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各 0.4μL |
样品制备所得 RNA 模板 （来于第 8 步） | 5.6μL |
|
|
| 稀释所得 6 个阳性对照 （来于第 6 步） | 各 5.6μL（2 号样到 2 号 管，3 号样到 3 号管…） | ||
| 超纯水 | 5.6μL | ||
| 10×qRT-PCR 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:2μL
过程 | 温度 | 时间 |
RT（逆转录） | 50℃ | 15-30 min |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
qRT - PCR 反应 （40 个循环）） | 95℃ | 15 sec |
58℃ | 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号） |
按仪器预设程序进行溶解曲线分析
四、数据处理
10. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值 为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
11. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于 或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于 或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等 于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大 于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。
电话
您的位置：
服务热线：
快速导航