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禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒

型    号:50次
所属分类:PCR-染料法
报    价: 市场价:
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禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒产品概述:

禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒

Avian Pathogenicity Escherichia coli(APEC)

产品及特点

禽致病性大肠杆菌 O1 血清型(Avian Pathogenicity Escherichia coli, APEC)会引发大肠杆菌败血症,尤其在冬季发病率高,死淘率通常在 5%-20%, 严重的可达 50%,雏鸡在夏季也较多发,病鸡精神不振,采食减少,衰弱和死 亡,病鸡腹部膨满,排出黄绿色的稀便,特征性的病变是纤维素性心包炎,气 囊混浊肥厚,有干酪样渗出物,肝包膜呈白色混浊,有纤维素性附着物,有时 可见白色坏死斑,脾充血肿胀,给养殖业带来较大的经济损失,因此禽致病性 大肠杆菌 O1 血清型检测具有重要的意义。本试剂盒根据荧光定量 PCR 原理开 发,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增非洲猪瘟病毒,与其他病原没有交 叉反应。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。

6. 本产品只能用于科研。 

禽致病性大肠杆菌O1血清型PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

PCR MagicMix 3.0

1 mL(红盖)  

试剂二

超纯水

1 mL(亮黄盖) 

试剂三

 禽致病性大肠杆菌 O1 血清型 PCR 引物混合液 

100 μL白盖) 

试剂四

禽致病性大肠杆菌 O1 血清型 PCR 阳性对照 

50 μL(黄盖)

试剂 天净沙核酸释放剂(试用装)  20 次(1mL、绿盖)

试剂

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。  

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作 为 PC。另外用水作为 NC。 

2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。

二、设置 PCR 反应(40μL 体系)

3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分: 

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

PCR 阳性 对照 

PCR Magic Mix 3.0 

20 μL

20 μL

20 μLL

禽致病性大肠杆菌 O1 血清 型 PCR 引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

 N+2 个样品 DNA 模板各 18 μL   

PCR 阴性对照(水)

 

  18 μL

 

 PCR 阳性对照(禽致病性大 肠杆菌O1血清型PCR阳性 对照的 10000 倍稀释液)    18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应:

过程

温度

时间

预变性

94℃ 

5 min

 

PCR 反应

35个循环

94℃ 

30 sec

50℃  30 sec

72℃ 

30 sec

 后延伸 72℃ 5 min

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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