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双歧杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒

双歧杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-24
  • 访  问  量:272
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0119
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

双歧杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒

Bifidobacterium spp.

产品及特点

双歧杆菌(Bifidobacterium)是一类存在于人体中非常重要的专性厌氧菌,于 1899 年首先在母乳喂养的健康婴儿粪便中发现并分离,研究证实双歧杆菌具有平衡肠 道菌群、降胆固醇、延缓衰老及抗肿瘤等生理功能,是人体益生菌群的主要组成。添加 双歧杆菌的微生态制剂开发研究已成为一大热点,广泛应用于食品、保健和医疗等领域。 但不断有报道指出国内外市场上双歧杆菌微生态制剂标示名称混乱,很多国家市场上双 歧杆菌制品假冒代替现象严重。针对该现象,开发了针对双歧杆菌特异性检测试剂盒, 本产品利用实时荧光定量 PCR 技术,通过荧光染料实时显示样品双歧杆菌模板 DNA 的量, 并通过坐标曲线表示出来, 结果直观准确。它具有下列特点: 

1. 根据双歧杆菌属 tuf 基因,设计的针对双歧杆菌的 PCR 引物,克服了其他细菌的 干扰。

2. 即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。

3. 荧光定量 PCR 检测,反应特异性强。

4. 本试剂盒可以进行 100 次 20uL 体系的 qPCR 反应。

5. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。

双歧杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

1.0 mL(A 袋包装)

试剂二

Tuf 基因专一性引物 A 

1 OD(A 袋包装)

试剂三

Tuf 基因专一性引物 B

1 OD(A 袋包装)

试剂四

超纯水 

1 mL×2(A 袋包装)

试剂五Tuf 基因阳性对照 (10E9 copy/μL) 50 μL(B 袋包装)

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输、-20℃保存(B 袋的阳性对照一定要放扩增区,A 袋的试剂放样品准备区),有 效期一年。 

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化双歧杆菌样品的 DNA,

二、引物的制备(在样品制备室进行)

2. 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水(加入量见引物试管上 的标签),使得两条引物的浓度均为 10 uM(10pmol/uL)。

三、稀释阳性对照(以 10E3-10E7 这 5 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高, 因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成 分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体菌做阳性对照,只 提供可以直接使用的长为 339bp 的 DNA 段作为阳性对照。

3. 标记 5 个离心管,分别为 7,6,5,4,3 号。

4. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。

5. 先将本试剂盒提供的双歧杆菌 Tuf 基因阳性对照用超纯水 10 倍梯度稀释到 10E8 拷贝/μL。放冰上待用。

6. 在 7 号管中加入 5 μL 10E8 拷贝/μL 的双歧杆菌 Tuf 基因阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用

 7. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的双歧杆菌 Tuf 基因阳性对照(上 步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

8. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 10E6 拷贝/μL 的双歧杆菌 Tuf 基因阳性对照(上 步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

9. 换枪头,在 4 号管中加入 5 μL 10E5 拷贝/μL 的双歧杆菌 Tuf 基因阳性对照(上 步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

10. 换枪头,在 3 号管中加入 5 μL 10E4 拷贝/μL 的双歧杆菌 Tuf 基因阳性对照(上 步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E3 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用

三、设置 PCR 反应(20 μL 体系,在样品制备室进行)

11. 在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次。样品管 和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有成分盖上盖子 储存好后后加):

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

PCR 阳性 对照管(2-7 管)

2×qPCR Mix

10 μL

10 μL

各 10 μL

Tuf 基因专一性引物 A,10 uM

1 μL 

21 μL 

各 1 μL 

Tuf 基因专一性引物 B,10 uM 

1 μL 

1 μL 

各 1 μL 

自备 10×ROX (见注)  

2 μL 

2 μL  

 2 μL 

 待测样品 DNA 模板 1-5 μL  
 阳性对照(1-6 号)    各 5μL(1 号到 1 号,2 号到 2 号…)

补水到 

20 μL 

 20 μL

20 μL

12. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行 优化)。 

过程

温度

时间

 预变性

95℃

5 分钟

 

PCR 反应

30 个循环

95℃

10 秒

 58℃45 秒

72℃ 

1 分钟

 复性72℃  5 分钟 

 

13. 数据采集 具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时, 大吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的大吸收光谱在 500 nm,大发射光 谱在 530 nm。

四、数据处理

14. 以 Tuf 基因序列阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。 再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样 品 DNA 的浓度。 

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