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蓝舌病病毒通用RT-PCR试剂

蓝舌病病毒通用RT-PCR试剂盒会引起鲍病毒病,危害的主要对象是我国 南方养殖的九孔鲍、杂色鲍,北方地区养殖的皱纹盘鲍。该病潜伏期短,发病急,传染 性强,死亡率高,造成鲍种苗及成鲍的大量死亡,4~30d 内死亡率高达 95%以上,溶 藻胶弧菌和副溶血弧菌可能会和病毒共同感染鲍并且是鲍病的共同致病因子。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-24
  • 访  问  量:337
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0121
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

蓝舌病病毒通用RT-PCR试剂

Bluetongue Virus(BTV)

产品及特点

蓝舌病病毒(Bluetongue Virus,BTV)会引起蓝舌病,是反刍动物的一种严 重传染病。以口腔、鼻腔和胃肠道黏膜发生溃疡性炎症变化为特征,病羊乳房和 蹄部也常出现病变,且常因蹄真皮层遭受侵害而发生跛行,该病毒主要侵害绵羊, 对养羊业造成严重损害,因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。为此本公司 基于 RT-PCR 原理开发了本产品,可用于在科研领域快速定量检测蓝舌病病毒。 它具有下列特点: 

1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2. 根据蓝舌病病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品参考国标 GB/T18636-2017 开发,只能用于科研,不能用于临床。 

蓝舌病病毒通用RT-PCR试剂规格及成分

编号

成  份

规格

试剂一

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橙色盖) 

试剂二

MMLV-Taq Mix

75 μL(红盖) 

试剂三

超纯水 

1 mL(蓝色盖) 

试剂四

蓝舌病病毒通用 RT-PCR 引物混合 

100 μL(白盖) 

试剂五

蓝舌病病毒通用 RT-PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) 

50 μL(黄盖)

试剂六

天净沙核酸释放剂试用装

20 次(1mL,绿盖)

试剂七

使用手册 

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。 

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 蓝舌病病毒 PCR 阳 性对照的 10000 倍稀释的(稀释后浓度为 1×10E4 拷贝/μL,10μL 相当于 1 万拷贝,可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中,充分混匀,此 为 100 倍稀释液。再取 10μL 此稀释液加入到 990μL 自备 TE 溶液中,充分 混匀,此为 10000 倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水 后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水 作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)

3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分: 

成分

N+2 个 样品管 

RT-PCR阴性对照

RT-PCR阳性

对照

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer 

各 4 μL

4 μL

4 μL

蓝舌病病毒通用 RT-PCR 引物混合 液 

2μL

2μL

2μL

N+2 个制备的 RNA 样品

12.5 μL

 

 

 超纯水

 

12.5 μL

 

蓝舌病病毒通用 RT-PCR 阳性对照 的 10000 倍稀释液

 

 

12.5 μL

MMLV-Taq Mix 

1.5 μL 

1.5 μL 

1.5 μL 

4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为: 

过程

温度

时间

逆转录 

42℃

60 分钟

预变性

95℃ 

5 分钟 

RT - PCR反应

30个循环)

95℃

30 秒 

58℃ 

30 秒

72

30 秒

 延伸 72 5 分钟

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果,阳性样品预期得到的扩增产物长度为 273bp。如 果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物,则说明实验失败,需要 分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增 产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有此扩增产物则为阳性, 如果无则为阴性。

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