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马轮状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

马轮状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-31
  • 访  问  量:280
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详细介绍
品牌其他品牌货号 XY-0295
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

马轮状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

Equine Rotavirus

产品及特点

马轮状病毒(Equine Rotavirus)是一种RNA病毒,该病毒每年在夏秋冬季流行,感染途径为粪口途径,临床表现为急性胃肠炎,呈渗透性腹泻病,病程一般为6-7天,发热持续1-2天,呕吐2~3天,腹泻5天,严重出现脱水症状,因此马轮状病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于PCR原理开发。它具有下列特点:

1.一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2.根据马轮状病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测,灵敏度比常规RT-PCR高10-100倍,可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术,RT和PCR两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于临床

马轮状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

 

成  份

 

 

规格

试剂一

2×qRT-PCR 缓冲液

500 μL(棕色管)

试剂二

10×qRT-PCR酶混合液

100 μL(红盖)

试剂三

 ROX染料I

50 μL(棕色管)

试剂四

ROX染料II

50 μL(棕色管)

试剂五

荧光PCR模板稀释液

1mL(亮黄盖)

试剂六

马轮状病毒RT-PCR引物混合液

100 μL(白盖)

试剂七

马轮状病毒RT-PCR阳性对照

(1×10E8拷贝/μL

50 μL(黄盖)

 试剂八

天净沙核酸释放剂试用装

20次(1mL,绿盖)

 试剂九

使用手册

1份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供RNA段作为阳性对照。

自备试剂  样品RNA

使用方法 一、稀释阳性对照(以10E2-10E7这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原。
1.标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。用带芯枪头分别加入45 μL 荧光PCR模板稀释液,用带芯枪头,下同)。
2.在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照(本试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
3.换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
4.换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
5.如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×10E4拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
6.用自选方法纯化N+2个样品的RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。
三、设置RT-PCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
7.如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液做模板)。下面只描述定量分析的步骤,定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个,其余不变。
8.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后后加):

成分

N+2制备所得样品

RT-PCR阴性对照

RT-PCR阳性

对照(2-7管)

2×qRT-PCR 缓冲液

10μL

10μL

各10μL

马轮状病毒RT-PCR

引物混合物

2μL

2μL

2μL

50×ROX (见注)

0.4μL

0.4μL

各0.4μL

 样品制备所得RNA模板(来于8

5.6μL

不加

不加

稀释所得6个阳性对照(来于第6步)

不加

不加

5.6μL(2号样到2号管,3号样到3号管

10×qRT-PCR

酶混合液

2μL

2μL

2μL

9.上机后按下面参数进行RT-PCR(参数可能会因仪器不同而需优化)。

过程

温度

时间

RT逆转录

50℃

15-30分钟

预变性

94℃

2分钟

RT - PCR反应

30个循环)

95℃

15 秒

60

15 秒(采集FAM通道的荧光信号

72

15 秒

仪器预设程序进行溶解曲线分析

四、数据处理
10.如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值,再推算出其浓度。
11.如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。

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