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支原体通用PCR试剂盒

支原体通用PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-08-10
  • 访  问  量:383
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0524
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

支原体通用PCR试剂盒

Mycoplasma spp.

产品及特点

支原体和亲缘关系很近的无胆甾原体等统称霉形体。霉形体是目前发现的 小的的原核生物。它们缺乏细胞壁、有变形能力、能通过滤菌器、可 在无生命培养基中生长繁殖,成为细胞培养中常见的一种污染源,严重影响细 胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。因此,对以支原体为 主的霉形体进行早期检测非常重要,它能使得研究人员在污染扩散前快速采取 有效措施,减低损失。本试剂盒是根据 PCR 原理开发,具有下列特点:

1. 免 DNA 制备,直接用裂解液做 PCR,更加简单快捷。

2. 覆盖广,根据 16S rDNA 保守区设计引物,能检测 40 余种霉形体(包 括欧盟药典要求检测的 9 种支原体)。

3. 特异性高,跟梭状芽孢杆菌、链球菌和乳酸杆菌等亲缘关系相近的微生物 无交叉反应。

4. 灵敏高,可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。

5. 提供内参和无感染性的支原体阳性对照(DNA 段),能有效避免实验结 果的假阳性和假阴性。

6. 可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于 临床诊断。

7. 本产品足够至少 50 次 40 μL 体系 PCR 检测(含阳性对照和阴性对照反 应)。 

支原体通用PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

PCR MagicMix 3.

1 mL(红盖)   

试剂二

超纯水

1 mL(亮黄盖) 

试剂三

支原体通用 PCR 引物混合 液

100 μL白盖) 

试剂四

支原体通用 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL)

50 μL(黄盖)

 

试剂 天净沙核酸释放剂试用装 20 次(1mL,绿盖)

试剂

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。 

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此 作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。 

二、设置 PCR 反应(40μL 体系)

3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分: 

成分

N+2

样品

PCR阴性对照

PCR阳性对照

PCR Magic Mix 3.0

各20 μL

20 μL

20 μL

支原体通用PCR引物混合液

各2 μL

2 μL

2 μL

 N+2 个样品 DNA 模板 各 18 μL  

PCR 阴性对照(超纯水)

 

18 μL

-

PCR 阳性对照(支原体通用 PCR 阳 性对照的 10000 倍稀释液)

-

 

18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应:

过程

温度

时间

预变性

95

5 min

PCR反应

(35个循环)

95

30 sec

55℃

30 sec

72℃

60 sec

后延伸

72

10 min

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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