支原体通用PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒，根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛，可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在，主要侵犯外胚层发育而成的组织，例如：皮肤、粘膜和神经组织。
产品型号：50次厂商性质：生产厂家更新时间：2020-08-10访 问 量：382
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| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | XY-0524 |
|---|---|---|---|
| 规格 | 50T | 供货周期 | 一周 |
| 主要用途 | 荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。 | 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业 |
支原体通用PCR试剂盒
Mycoplasma spp.
产品及特点
支原体和亲缘关系很近的无胆甾原体等统称霉形体。霉形体是目前发现的 小的的原核生物。它们缺乏细胞壁、有变形能力、能通过滤菌器、可 在无生命培养基中生长繁殖，成为细胞培养中常见的一种污染源，严重影响细 胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。因此，对以支原体为 主的霉形体进行早期检测非常重要，它能使得研究人员在污染扩散前快速采取 有效措施，减低损失。本试剂盒是根据 PCR 原理开发，具有下列特点：
1. 免 DNA 制备，直接用裂解液做 PCR，更加简单快捷。
2. 覆盖广，根据 16S rDNA 保守区设计引物，能检测 40 余种霉形体（包 括欧盟药典要求检测的 9 种支原体）。
3. 特异性高，跟梭状芽孢杆菌、链球菌和乳酸杆菌等亲缘关系相近的微生物 无交叉反应。
4. 灵敏高，可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。
5. 提供内参和无感染性的支原体阳性对照（DNA 段），能有效避免实验结 果的假阳性和假阴性。
6. 可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于 临床诊断。
7. 本产品足够至少 50 次 40 μL 体系 PCR 检测(含阳性对照和阴性对照反 应)。
支原体通用PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | PCR MagicMix 3. | 1 mL（红盖） |
试剂二 | 超纯水 | 1 mL（亮黄盖） |
试剂三 | 支原体通用 PCR 引物混合 液 | 100 μL（白盖） |
试剂四 | 支原体通用 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50 μL（黄盖））
|
| 试剂五 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20 次（1mL，绿盖） |
试剂六 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
成分 | N+2个 样品管 | PCR阴性对照 | PCR阳性对照 |
PCR Magic Mix 3.0 | 各20 μL | 20 μL | 20 μL |
支原体通用PCR引物混合液 | 各2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | ||
PCR 阴性对照（超纯水） |
| 18 μL | - |
PCR 阳性对照（支原体通用 PCR 阳 性对照的 10000 倍稀释液） | - |
| 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR反应 （35个循环） | 95℃ | 30 sec |
55℃ | 30 sec | |
72℃ | 60 sec | |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
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