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禽呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒

禽呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒会引起鲍病毒病,危害的主要对象是我国 南方养殖的九孔鲍、杂色鲍,北方地区养殖的皱纹盘鲍。该病潜伏期短,发病急,传染 性强,死亡率高,造成鲍种苗及成鲍的大量死亡,4~30d 内死亡率高达 95%以上,溶 藻胶弧菌和副溶血弧菌可能会和病毒共同感染鲍并且是鲍病的共同致病因子。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-23
  • 访  问  量:300
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详细介绍
品牌其他品牌货号XY-0085
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

禽呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒

Avian Reovirus(ARV)

产品及特点

禽呼肠孤病毒(Avian Reovirus,ARV) 会引起禽呼肠孤病毒感染,是鸡的一 种传染性疾病,可引起鸡多种疾病,包括病毒性关节炎、矮小综合征、呼吸道疾 病、肠道疾病和所谓吸收不良综合征。急性感染时,可见跛行,有些鸡发育不良。 慢性感染跛行更显著,有一小部分病鸡的踝关节不能活动。有时可能看不到关节 炎/腱鞘炎的临诊症状,但在屠宰时可见趾屈肌腱区域肿大。这样的鸡群增重慢, 饲料转换率低,总死亡率高,屠宰废弃率高,属于不明显感染,因此灵敏快捷的 诊断产品具有重要的意义。本产品基于 PCR 原理开发。它具有下列特点:

1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2. 根据禽呼肠孤病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。

禽呼肠孤病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橘黄盖)

试剂二

MMLV-Taq Mix

75 μL(红盖)

试剂三

超纯水

1 mL(亮黄盖)

试剂四

禽呼肠孤病毒 RT-PCR 引物混合液

100 μL(白盖)

试剂五

禽呼肠孤病毒 RT-PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL)

50 μL(黄盖)

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。 

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 禽传染支气管炎病毒 通用 RT-PCR 阳性对照的 100 倍稀释的(稀释后浓度为 1×10E6 拷贝/μL, 10μL 相当于 1 万拷贝,可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中, 充分混匀,此为 100 倍稀释液。)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加 水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用 水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)

3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:

成分

N+2制备所得样品

RT-PCR阴性对照

RT-PCR 阳 性对照管 

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

禽呼肠孤病毒 RT-PCR 引物混合 液

2μL

2μL

2μL

N+2 个制备的 RNA 样品)

12.5 μL

 

 

 超纯水

 

12.5 μL

 

禽呼肠孤病毒 RT-PCR 阳性对照 的 10000 倍稀释液

 

 

12.5 μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:

过程

温度

时间

逆转录

42℃

30 min

预变性

95℃

5 min

PCR 反应 (35 个循环)

95℃

30 sec

55℃

30 sec

72

65 sec

 延伸 727 min

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物, 则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有预期扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有 预期 674bp 大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。

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