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禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒

型    号:50次
所属分类:PCR-染料法
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禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒会引起鲍病毒病,危害的主要对象是我国 南方养殖的九孔鲍、杂色鲍,北方地区养殖的皱纹盘鲍。该病潜伏期短,发病急,传染 性强,死亡率高,造成鲍种苗及成鲍的大量死亡,4~30d 内死亡率高达 95%以上,溶 藻胶弧菌和副溶血弧菌可能会和病毒共同感染鲍并且是鲍病的共同致病因子。

禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒产品概述:

禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒

Avian Reticuloendotheliosis Virus(REV)

产品及特点

网状内皮增殖病是由网状内皮组织增殖症病毒(Reticuloendotheliosis Virus, REV)引起的一种肿瘤性传染病,病鸡表现为贫血、消瘦,生长缓慢等。病理解剖特点 是肝脏、肠道、心脏和其它器官有淋巴瘤,胸腺和法氏囊萎缩,腺胃炎。本病能侵害机体 的免疫系统,可导致机体免疫机能下降或继发其它疾病。本产品就是专门用于 REV 的 RT-PCR 检测的试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供病毒 RNA 模板。

2. 提供阳性对照,便于在遇到问题时分析原因。

3. 引物根据 REV 病毒保守的 LTR 序列设计,不与其他病毒发生交叉反应。

4. 使用两步式 RT-PCR,先做 RT 再做 PCR,操作更加灵活。

5. 本试剂盒灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

6. 本试剂盒足够 50 次 20 μL 体系的 RT 反应,50 次 40 μL 体系的 PCR 反应。

7. 本产品只用于科研

禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒规格及成分

编号

成分

规格

试剂一

MMLV(含 RI) 

50 μL(黄盖) 

试剂二

RT Buffer(含 dNTP) 

250 μL(白盖)

试剂三

超纯水

1 mL(本色盖))

试剂四

PCR MagicMix 3.0(含染料) 

1 mL(红盖) 

试剂五

网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 引物混合液 

100 μL(白盖) 

试剂六 网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 阳性对照 50 μL(黄盖)
试剂七 RNA 病毒裂解液(试用装)  15 次(10mL)

试剂八

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到试剂盒后请将阳性对照放置到专 门区域,因为其含有较高浓度的扩增产物,容易污染其他试剂。  

自备试剂 样品RNA

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 禽传染支气管炎病毒 通用 RT-PCR 阳性对照的 100 倍稀释的(稀释后浓度为 1×10E6 拷贝/μL, 10μL 相当于 1 万拷贝,可以将 10μL 原液加入到 990μL 自备 TE 溶液中, 充分混匀,此为 100 倍稀释液。)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加 水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用 水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。

二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)

3. 如果有 N+2 次 RNA 提取,则按照下表设置 N+2 个 RT 反应体系(20 μL 体系): 

成分

用量

RNA 模板(自备) 

1-10 μL 即可

网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 引物混合液

2 μL

超纯水

补水到 14 μL

RT Buffer(含 dNTP) 

 5 μL 

MMLV(含 RI)

 1 μL 

4. 42℃保温 60 min,70℃保温 10 min 以终止反应,然后放置在冰上待用。此为 cDNA 样品。

三、设置 PCR 反应

5. 对 N+2 个 cDNA 样品,则在 N+4 个 PCR 管中加入下列成分(多的一个是 PCR 阴 性对照,一个是 PCR 阴性对照):

成分

N+2制备所得样品

PCR 阴性对照

PCR 阳性对照 

PCR MagicMix 3.0

20 μL 

20 μL 

20 μL 

网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 引物混合物

2 μL

2μL

2μL

N+2 个 cDNA 样品

5 μL 

 

 

 网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR 阳性对照 

 

 

 

补超纯水到 

40 μL 

40 μL 

40 μL

 6. 上机进行 PCR,PCR 反应参数为:

过程

温度

时间

逆转录

42℃

60 min

预变性

94℃

5 min

PCR 反应 (35 个循环)

94℃

0.5 min

55℃

0.5 min

72

0.5 min

 后延伸 7210 min

7. 取 10uL PCR 产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳,正确的扩增产物的大小为 220 bp。 阳性对照必须出现 220bp 的 PCR 产物,否则 RT-PCR 体系有问题,需要寻找原因。 如果阴性对照出现 220bp 的 PCR 产物,则说明试剂或环境中有过去 PCR 产物的污 染,需要把样品制备和 PCR 反应后电泳充分隔离进行。如果发生了污染,则需要另 外设计引物,本试剂盒提供的引物和阳性对照将不可用。 

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