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粪肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

粪肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒是群中等小的双股 DNA 病毒,根据其理化性质分 α、β、γ、未分类疱疹病毒四个亚科。疱疹病毒感染的宿主范围广泛,可感染人类和其他脊椎动物。在自然界广泛存在,主要侵犯外胚层发育而成的组织,例如:皮肤、粘膜和神经组织。

  • 产品型号:50次
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2020-07-30
  • 访  问  量:310
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详细介绍
品牌其他品牌货号 XY-0274
规格50T供货周期一周
主要用途荧光定量PCR具有更高的扩增效率、更高的扩增灵敏度、更高的扩增特异性。应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业

粪肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

Enterococcus faecalis

产品及特点

粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是革兰氏阳性,过氧化氢阴性球菌, 是人和动物肠道内主要菌群之一,其能产生天然抗生素,有利于机体健康;同时 还能产生细菌素等抑菌物质,抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长,改善肠 道微环境;还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐菌的繁殖,减少肠道尿素酶和内 毒素的含量,使血液中氨和内毒素的含量下降。粪肠球菌作为一种益生菌,在医 学和食品工程领域得到广泛应用。另外,肠球菌为消化道内正常存在的一类微生 物,在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力,并且是一种兼性厌氧的乳酸菌,与厌 氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比,更适合于生产和应用。本产品就是以染 料法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测粪肠球菌的试剂盒,它具有下列 特点:

1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。

2. 特异性高,引物是根据粪肠球菌高度保守区设计,不会扩增其他微生物。

3. 引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR 高 100 倍。

4. 提供无传染性的 PCR 阳性对照,便于区分假阴性样品。

5. 一管式操作,荧光 PCR 检测,不容易产生环境污染。

6. 本产品只能用于科研,本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 PCR。

粪肠球菌染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

 

编号

成分

规格

试剂一

2×PCR MagicMix

500μL(棕色)

试剂二

荧光 PCR 模板稀释液

1 mL(黄盖)

试剂三

粪肠球菌染料法 qPCR 引物混 合液

100 μL(白盖)

试剂四

粪肠球菌染料法 qPCR 阳性对 照(1×10E8 拷贝/μL)

50μL(红盖)

试剂五 天净沙核酸释放剂试用装 20 次(1mL,绿盖))

试剂六

使用手册

1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。

自备试剂   样品 DNA。

使用方法 一、制备标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。 由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能 污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原, 本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 段作为阳性对照。

1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,用带芯枪头, 下同)。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(其浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提 供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所 得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备 阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)

9. 如果进行定量分析,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照,6 个用于标准曲线样品。如果做定 性分析,则 6 个标准曲线样品只选一个做(可以选 4 号,其余样品不变)。 以下只介绍定量分析的反应设置。

10. 在标记管中按下表加入各成分:

成分

样品管 N+2 个

PCR 阴性 对照管

标准曲线 样品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各 10 μL

粪肠球菌染料法 qPCR 引物 混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

自备 10×ROX (见注)

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2 个待测样品 DNA 模板 

6 μL

 

 

自备超纯水  6 μL 

第 7 步所得 PCR 阳性对照 稀释液(2-7 号)

 

 

各 6μL(2 号样到 2 号管,3 号样到 3 号管…)

11. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同 而自行优化)。

四、荧光定量 PCR 反应参数

过程

温度

时间

 预热50℃ 2 min

预变性

95℃

10 min

 

PCR 反应

(40 个循环

95℃

15 sec

60℃

1 min(采集 SYBR 通道的荧 光信号)

五、数据处理

12. 设定 60℃-96℃范围的熔解曲线分析,排除假阳性。

13. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。

14. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 32。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct 值应该 小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct 大于或等于 32 则为阴性,如果小 于或等于 30 则为阳性。如果在 30-32 之间,则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 32 则为阴性,如果小于 30,则为阳性。

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