Western免疫印迹技术大汇总（上）

更新时间：2021-08-12

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各位小伙伴们，我们又见面了

好久没有更新一些技术性的文章了，今天我们就来讲讲蛋白质技术，对，没错，就是Western免疫印迹，这个实验相信各位小伙伴们，也是耳熟能详了，但是呢，还是有不少下伙伴们在实验过程中，会出现各种各样的问题，所以为了解惑各位小伙伴们，今天我们就出一期关于Western免疫印迹实验的知识点，其中包括它的概念、原理、应用场景、操作步骤以及注意事项等。

Western免疫印迹是什么

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。

Western免疫印迹原理

与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，探针是抗体，显色用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

Western免疫印迹应用场景

■ 从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；

■ 定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；

■ 用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。

Western免疫印迹操作步骤

Western操作步骤一共分为八大步骤，在这里呢，我就简单向大家介绍大致的步骤，为了出于严谨性，我们将在下一期为大家专门介绍操作步骤的详细介绍。

八大步骤：

一、试剂的准备

二、蛋白样品制备

三、蛋白含量的测定

四、SDS－PAGE电泳

五、转膜

六、免疫反应

七、化学发光，显影，定影

八、凝胶图象分析

Western免疫印迹注意事项

1. 一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。

2. 显色液必须新鲜配置使用，最后加入H2O2。

3. DAB有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细