简述ELISA试验与操作使用

简述ELISA试验与操作使用ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体，ELISA试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。因为其试剂不乱、易保留，操纵简便，结果判定较客观等因素，已广泛应用在免疫学检修的各领域中。然而，影响ELISA试验结果的因素良多，故加强各个环节的质量保证才能充分施展其方法学的长处。ELISA试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记，此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。因为酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既留存其免疫学活性，又留存酶的活性。 

操作注意事项：
1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 　　

5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。