利用抗原亲和纯化多抗问题

首先，western blot不能用来说明抗体效价，而需要在严格确定抗原浓度的情况下，通过ELISA等实验来说明。因为WB检测的抗原蛋白是一种变性伸展的状态，而非活性状态；
第二，1:200的抗血清稀释度（甚至1:20）可以得到背景较小的条带，你的实验可能需要充分washing及blocking，以减少非特异性吸附。
第三，不知你用什么方法染色？注意时间不要太长，能看到你的条带即可，一般用DAB染色不超过5min（2～3min，37 C）。